前列腺特异抗原.ppt

outline Biological feature Objective procedure Visual examination Preliminary tests Confirmatory tests Individual identification Biological feature Typical ejaculation 2-5 milliliters of semen Sperm: 107/ ml~ 108/ ml 3 pg DNA/sperm 480,000 ng DNA/ejaculate Only 1 ng DNA needed for STR typing! semen 含蛋白质、各种酶及果糖等多种成分的碱性乳白色胶状液体 成分： 细 胞：精子、睾丸细胞、脱落柱状上皮细胞、 白细胞 非细胞：前列腺卵磷脂小体、玻璃小体、精胺结 晶、色素颗粒、脂肪球 弱碱性 pH7.2~8.6 Preliminary test 预试验 目的:筛选可疑精斑 特点：方法简单，灵敏度高 方法： 酸性磷酸酶检验 结晶试验 其它：锌检出法，马铃薯凝集试验 精斑确证试验 检测精液特有成分 阳性结果可确认精斑 方法： 精子检出法 免疫学实验（抗人精血清沉淀反应、前列腺特异抗原检测） 精子检出时限 活精子：阴道3~8h；宫颈2—5d；子宫、输卵管1~10d 死精子：阴道3~9d；宫颈17d 与被害人体位、活动情况及月经周期有关 取材部位：活体阴道拭子1.5~2d；尸体3w （阴道后穹窿及宫颈刮片） 精斑的个人识别 传统的遗传标记：ABO 血型、酶型、血清型等 DNA多态性标记 精斑DNA分析 精子DNA提取 精子细胞核膜是富含二硫键的交联蛋白组成的网状结构，必须在DTT等试剂作用下使－S-S－还原成－SH，核蛋白才能被SDS、蛋白酶K分解，释放出DNA Y-STR在性犯罪案件中的意义 不受女性成分干扰 轮奸案 父系遗传，可利用家系排查 Sexual assault Collection of other biological evidence 案例2 某年某月某日，某市一四岁女孩被强奸。由于阴道严重损伤，大量出血，回家后女孩的母亲将其粘有大量血迹的裤子换下放入一大盆内放水浸泡准备清洗 问题：检材已被大量稀释，如何获取精子？ 案例3 杨某某，女性，14岁，父母到派出所报称该女孩已失踪3周。后派出所组织人员到后山上进行搜索，在一山洞发现一高度腐败尸体。 问题：高腐尸体如何提取精斑？ 答案：尸体阴道内的精子数目多且保存时间长，检出率的高低与阴道提取部位有关（宫颈刮片和阴道后穹隆部拭子较高）。在本案中，虽尸体已高度腐败但仍能对阴道拭子精子DNA进行分析，最终锁定犯罪嫌疑人。 案例4 2004年8月某一女子夜间在自家被强奸。现场提取嫌疑人擦拭过的卫生纸一份和受害人内裤一条。PSA结果阳性，但多次检验均无DNA分型。 问题1：性犯罪案件中出现此种情况该如何考虑？ 问题2：是否可以进行DNA检验？如何做？ 答案：犯罪嫌疑人供称因计划生育曾做过输精管结扎术。（无精子精斑不可二步消化提取DNA） 染 色 方 法 精子染色 单染法 复染法 藻红 亚甲蓝 苏木素 精子和基质染成相同的颜色 HE染色 酸性品红亚甲蓝 胭脂红 精子头、尾和基质染成不同的颜色 藻红染色（头和尾均为红色） 酸性品红亚甲蓝染色 （头部红色，尾部蓝色） 一个完整精子/几个典型精子头即可确证精斑 免疫学试验——抗人精血清 Blank control Human control Sheep control Q1 Q2 Q3 Human antiserum agar gel diffusion test 醌是对含有环己二烯二酮构造的一类化合物的总称。 前列腺特异抗原（prostate specific antigen，PSA） γ－精浆蛋白，由人类前列腺上皮细胞分泌，是精浆特有糖蛋白，分子量30 000，故名p30 性质稳定，是确证精斑的理想标记。 抗－p30有高度种属特异性和前列腺器官特异性。 灵敏、特异，不受阴道液、唾液及有无精子影响。 加 样 区 反 应 区 吸 附 区 检测线 鼠抗人p30 质控线 羊抗鼠IgG 玻璃纤维 免疫胶体金 鼠抗人p30 硬质塑料底板 玻璃纤维 胶体金p30抗原检测试纸条——PSA试纸条 抗体凝集能力下降或消失 不凝集 具有相应的抗原 精斑ABO血型测定——中和试验 设置已知对照；注意假阴性，抗血清必须标化！ 精斑浸液 (可溶性抗原) 抗A 抗B 抗H 30分钟 A-c