同型半胱氨酸和蛋氨酸合成酶A66G基因多态性与Alzheimer病的关系.pptVIP

同型半胱氨酸和蛋氨酸合成酶还原酶A66G基因多态性与Alzheimer病的关系 实习生：陈晶砺 指导老师：陈盛强主任 实习医院：广州医学院第二附属医院 目的 探讨同型半胱氨酸(Ｈｃｙ)和蛋氨酸合成酶还原酶(MSR)A66G基因多态性与Alzheimer病的关系。 研究背景 Alzheimer病是老年性痴呆中较常见的一种,其病因未明确,是一种神经系统变性疾病,临床表现为进行性加重的智力障碍,病理特征为老年斑和神经纤维缠结。 蛋氨酸循环 研究背景 研究背景 血中同型半胱氨酸(Ｈｃｙ)浓度升高的原因有遗传和环境营养两种因素 研究背景 遗传因素：胱硫醚β-合成酶（ＣＢＣ）缺陷、５，１０-亚甲基四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）、蛋氨酸（甲硫氨酸）合成酶（ＭＳ）缺陷等； 环境因素：维生素Ｂ６、Ｂ１２和叶酸摄入不足等。 此外血浆ＨＣＹ还与血胆固醇水平、血压正相关，慢性肾衰、甲减也可导致ＨＣＹ升高。 研究对象 ＡＤ组：ＡＤ病例共66例,其中男29例,女37例,诊断标准为ＤＳＭ ⅢＲ(美国精神病协会的精神障碍诊断和统计手册),年龄为60～93岁; 对照组：143例对照者(既往无心脑血管病、糖尿病、慢性肝病、慢性阻塞性肺气肿、支气管哮喘等病史),其中男65例,女78例,年龄与患者相近。 研究对象 以上研究对象全部来自广州市老人院,均为随机选择,无血缘关系。以上各组研究对象均排除高血压、心脏病、脑血管病、周围血管病、高血脂、糖尿病、吸烟、肾功能不全、药物因素等对血浆中总Ｈｃｙ水平的影响。 两组间性别和年龄差异无显著意义。 研究方法 运用多聚酶链反应限制性内切酶片段长度多态性技术(ＰＣＲ-ＲＦＬＰ)和荧光偏振法(ＦＰＩＡ)检测66例阿尔茨海默病及143例正常人ＭＳＡ2756Ｇ基因多态性和血浆总Ｈｃｙ水平。 研究方法 试验结果 经ＰＣＲ扩增后ＭＳＲ基因目的片段大小为１５１bp 重复性实验：10份标本,每份重复5次PCR扩增,均产生同样结果 试验结果 MSR等位基因的指定 ：ＭＳR基因片段ＰＣＲ扩增产物长度分别为151ｂｐ。ＭＳR A66G突变的G等位基因ＰＣＲ扩增产物经NdeI消化后裂解成124和27ｂｐ两个片段.聚丙烯酰胺凝胶电泳显示MSR基因酶切产物存在两种等位基因(A,G)和三种基因型(AA:纯合野生型;AG:突变杂合型;GG:纯合突变型，各表型的酶切片断的大小为:AA151bp;AG151bp、124bp、27bp;GG124bp、27bp) 试验结果 试验结果 由上电泳图可得：MSR A66G基因多态性泳道M为分子量标记,泳道1,2,5,6,7,8,9为MSRA66G突变杂合型;泳道3,4为MSRA66A纯合野生型;泳道10为MSRG66G纯合突变型。 试验结果 ⑴ＡＤ组与对照组MSR A66G基因型频率与等位基因频率的分布 : 例数 MSR A66G基因型频率(%) 等位基因频率(%) Ａ/Ａ Ａ/Ｇ Ｇ/Ｇ Ａ Ｇ AD组 66 98.48(65) 1.52(1) 0.00(0) 0.9924 0.0076 对照组 143 98.60(141) 1.40(2) 0.00(0) 0.9930 0.0070　 　 由表可知, MSR A66G各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性(Ｐ0 05)。 ⑵ＡＤ组与对照组血浆总Ｈｃｙ, 叶酸,VitB12水平比较： N Hcy(μmol/L) 叶酸 (nmol/L) VitB12(pmol/L) ＡＤ组 66 14.72±6.2 15.56±5.51 475.09±175.18 对照组 143 10.9±2.44 17.75±6.82 433.53±157.47 由表可知,ＡＤ患者血浆总Hcy水平显著高于正常组,两者差异有显著差异(Ｐ0.05), 叶酸、VitB12水平两者差异无显著差异。 ⑶ＡＤ组与对照组MSR A66G三种基因型携带者之间血浆同型半胱氨酸水平比较 ： 血浆同型半胱氨酸水平 (μmol/L) A/A A/G G/G 对照组 (7.82±2.31) (7.99±2.41) (7.94±2.39