细菌和噬菌体重组和连锁.pptVIP

Chapter7 细菌和噬菌体的重组和连锁;本章内容 7.1 细菌和病毒遗传学研究中的地位 7.2 细菌的遗传分析 7.3 噬菌体的遗传分析;细菌是单细胞生物，细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质和核区，部分细菌还有某些特殊结构，如鞭毛、伞毛、荚膜、芽胞、气泡等；;细菌细胞结构的特点;病毒的一般特性;病毒的分类;细菌和病毒在遗传研究中的优越性;细菌和病毒在遗传研究中的优越性;细菌和病毒的拟有性过程;细菌的杂交实验 1946年，J.Lederberg E.Tatum 的大肠杆菌杂交试验： 材料：大肠杆菌(Escherichia coli)K12菌株的两个营养缺陷型品系： 菌株A—甲硫氨酸缺陷型 met- 和生物素缺陷型 bio-； 菌株B—苏氨酸缺陷型 thr- 和亮氨酸缺陷型 leu-。 方法：将A(met-bio-thr+leu+)、B(met+bio+thr-leu-)两菌株混和，在基本培养基(固体)上涂布培养。 结果：平板上长出原养型菌落(++++)。;;上述试验获得的原养型菌落可能产生于： 亲本菌株A或B发生了回复突变； 两品系细胞通过培养基交换养料—互养作用； 两品系间发生了转化作用； 发生细胞融合，形成了异核体或杂合二倍体。 为了验证这些原养型菌落产生的可能而进行的研究最终表明：这些解释均不成立。;回复突变可能的排除;互养作用及其排除;异核体和杂合二倍体的可能性;转化作用及其排除;W.Hayes的实验（1952）;Hayes(1952)研究表明： 大肠杆菌两种不同菌株(品系)接合过程中遗传物质的转移是单向的，从而认为大肠杆菌存在两种类型：雌性与雄性，分别作为接合过程中遗传物质的受体(菌株B)与供体(菌株A) 。 原因解释： 在含有链霉素的培养基中,A菌株(str处理)× B菌株可以得到原养型，原因是供体虽然对链霉素敏感，细胞不能分裂，但并不影响供体的基因转移；受体未用链霉素处理，所以不影响细胞分裂，接受外源遗传物质后，从而在基本培养基上出现原养型菌落。 而B菌株(str处理)×A菌株就不能得到原养型，因为受体用链霉素处理后，虽然供体转移遗传物质，但受体细胞不能分裂，所以不能形成原养型菌落。;F因子及其在杂交中的行为;左边是供体菌F+，右边是受体菌F-;F 质粒与细菌接合;另一方面， F+细菌丢失F因子后，还???变成F-细菌。最有效的方法是用吖黄素处理．调节吖黄素的浓度，使这浓度不防碍细菌的增殖，但可选择性的阻碍Ｆ因子的复制．这样在含有吖黄素的培养液中培养F+细菌，所有的细菌都成为F-。 虽然F+细菌能高效率的将F-细菌变为F+细菌，但细菌自身染色体很少通过接合而转移到F-细菌，所以染色体上基因的重组频率很低，还不到百万分子一。; F因子的特点;但实验中又发现，一个供体菌A，跟受体菌B杂交时，出现的重组子频率很高，几乎比F+×F-杂交高上一千倍。我们把这个新的菌株叫高频重组（high frequency of recombination）菌株，或简称Hfr菌株。 Hfr菌株（高频重组菌株）：指 F 因子整合到宿主染色体中去了的菌株，其重组频率比 F+ 高1000多倍。 ; 另外，环形的F因子还应有DNA复制相关的基因，以保证F因子本身的复制。;F因子与大肠杆菌的3种的存在状态:; 1957年E.Wollman和E.Jacob设计完成: Hfr:thr+leu+azirTonrlac+gal+strs× F-:thr-leu-azisTonslac-gal-strr 将对链霉素敏感的Hfr菌株与对链霉素有抗性的F-菌株混合培养，每隔一段时间间隔取样，然后剧烈震荡以中断杂交，分开已经紧密接合的供体和受体杂交对。然后将稀释后的培养物接种到含链霉素,但不含苏氨酸、亮氨酸培养基上，以选择含有供体基因的抗链霉素受体细菌。 该方法主要根据基因转移的先后次序，以时间为单位，求基因间的遗传距离。;中断杂交实验结果;Hfr与F-的接合; Hfr品系与F＋菌株的异同;同一个Hfr菌株的转移的起始点以及转移顺序在不同实验中都是相同的。 但一个F+品系可产生许多Hfr品系，这是因为F因子在细菌染色体上有许多插入位点而且其插入取向不同而形成的。用这些不同Hfr菌株进行中断杂交实验，则它们的转移起点、基因转移顺序以及转移方向都不相同。 ;用一种大肠杆菌的不同Hfr菌株进行中断杂交实验，作出连锁图，其基因向F-细胞转移的顺序不同。 ;; Hfr细胞和F- 细胞之间的接合管常会自发断裂，进入的Hfr染色体也随之断裂，一般说很少有整条Hfr染色体转入F- 细胞的，因此： （一） F- 细胞得到的只是F因子的一部分，F因子其余部分依赖于整条Hfr染色体的转移，这样Hfr×