再生心肌细胞的另一新来源——人胎盘组织.pdfVIP

新的孔板中，同时用未经诱导分化的人胎盘干细胞作对照，待24h细胞贴壁伸展 后进行检测：具体步骤按SABC染色试剂盒说明书操作，弃掉孔板内培养液，PBS 酶，BSA封闭后分别加入1：200稀释的小鼠抗人Cl—sarcomericactin抗体，湿盒内4 ℃孵育过夜，用生物素标记的山羊抗小鼠IgG--抗孵育1h，光镜下观察。 6、细胞免疫荧光检测心肌特异性肌钙蛋白表达：将孔板内分化细胞重新接种 于新的孔板中，同时用未经诱导分化的人胎盘干细胞作对照，待24h细胞贴壁伸 察。 2dEBs 7、RT-PCR检测心肌特异性基因Anf,13-MHCmRNA表达：收集第1 中跳动细胞的总RNA，用RT-PCR方法检测Anf,B-MHCmRNA，操作步骤严格 按照说明书进行。 挂 甲 当日 木 1、组织块培养1ld左右，可见后有少量细胞爬出，随着细胞数目的增多，贴 壁的组织块逐渐脱落，细胞呈漩涡状生长或成簇生长，胞体变得细长，形态类似 成纤维细胞，培养3W左右，细胞可达到80％融合，细胞经传代贴壁后，细胞变成 梭形并逐渐形成干细胞集落。 2、流式细胞仪检测显示：来源于人胎盘组织的第3代细胞表达CD29、CDl05， HLA．DR。 3、悬滴分化培养法培养3d后将形成的白色的EBs接种到24孔培养板中，接种 后5d(悬滴后8d)，于倒置显微镜下观察至lJEBs周围可见到自发性节律收缩的心 肌细胞团，不同EBs中的心肌合胞体显示出的收缩性和形态有所不同。 4、a．横纹肌肌动蛋白的细胞免疫化学检测发现细胞胞浆内有棕黄色颗粒的阳 组胞浆染色呈阴性。 3 5、心肌特异性肌钙蛋白I的细胞免疫荧光检测发现诱导12d的细胞染色呈阳 强烈的绿色荧光，可见心肌细胞特征性横纹结构，而对照组胞浆染色呈阴性。 6、在第12dl珧,动的心肌细胞群中，可见心肌细胞特征性基因Anf、[j-MHC表达。 结论 1、胎盘中存在着丰富的干细胞，不仅来源广泛，且对其研究不会涉及伦理道 德和法律问题，为人类提供了新的干细胞种子来源。 2、利用“悬滴．贴壁”培养法可诱导胎盘来源的干细胞向心肌细胞分化，被 诱导分化成有节律性跳动的心肌细胞群，且均不同程度表达各种心肌细胞特征性 基因和心肌蛋白。 总之，采用“悬滴．贴壁”培养法将胎盘来源的干细胞诱导分化成节律性跳动 的心肌细胞群，并且胎盘干细胞的提取对胎儿与母体均不产生损伤作用，对其研 究不会涉及伦理法律问题，且来源广泛，可以作为再生医学中干细胞的一种新的 来源。 关键词 胎盘；干细胞；心肌细胞；分化 4 英文论著摘要 Anewsourceof regenerated cardiomyocytes human tissue placenta ective obj Cardiovasculardiseaseistheoneofthe causesof forms leading mortality，many ofdiseaseresultinthe lossof or progressivemyocytesbyapoptosisnecrosis，which can toheartfailureand disease