荧光定量PCR技术原理、方法、数据分析详述.pptxVIP

广州维伯鑫生物科技限公司 GUANGZHOU VIPOTION BIOTECHNOLOGY CO., LTD; Q-PCR技术培训 匡杰斌 广州维伯鑫生物科技有限公司 技术服务部 2013.12.13 ;RNA提取;RNA提取方法 RNA纯度与质量考察 RNA提取常见问题及解决方案;样品;异硫氰酸胍/苯酚法 在变性剂异硫氰酸胍的作用下，细胞被裂解，同时核蛋白体上的蛋白变性，核酸释放； 释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而分别位于整个体系中的中间相和水相，从而得以分离； 有机溶剂抽提，沉淀，得到纯净RNA。 ;组织/细胞样品RNA提取; 纯度：紫外分光光度计测定所提总RNA在260nm和280nm波长处的光吸收，以A260/A280的比值来判断总RNA的纯度。 蛋白中trp、tyr、phe的吸光度为280nm，所以280nm常用 来表示蛋白质吸光度；而260nm为核酸的吸光度。 理论上，纯的RNA情况下：OD260/OD280的值为2，纯的DNA情况下：OD260/OD280的值为1.8。 实际所用RNA应处于1.8-2.0之间，最好是1.9-2.0之间。 质量：甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定。;RNA提取常见问题及解决方案;RNA的降解;RNA的保护;蛋白质污染： 不要吸入中间层及有机相，加入氯仿后首