荧光定量PCR完全攻略课件-新.pdfVIP

上海闪晶分子生物技术研究所 专业公司，打造专业服务！ 荧光定量PCR完全攻略 1、什么是定量PCR ？ 以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中 靶基因的拷贝数，称为定量PCR 。定量PCR 的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 2、定量PCR定量的理论依据是什么？ 特定的待扩增基因片段起始含量越大，则指数扩增过程越短，当扩增速率趋于稳定后， 则无论原来样品中起始模板含量多少，最终扩增片段的含量通常是一样的。 理想的扩增结 果：Y=X×2n 其中Y代表扩增产物量， X代表PCR反应体中的原始模板数 n为扩增次数； 理 论上PCR扩增效率为 100%，PCR产物随着循环的进行成指数增长，但实际上：DNA 的每一 次复制都不完全，即每一次扩增中，模板不是呈 2 的倍增长；实际应为：Y= X(1+E)n ，其 中E 代表扩增效率：E = 参与复制的模板/总模板，通常E≤1，E在整个PCR扩增过程中不是 固定不变的。通常X 在 1～105 拷贝、循环次数n≤30 时，E 相对稳定，原始模板以相对固 定的指数形式增