三节植物离体培养体系建立.pptVIP

;一、植物组织培养的阶段划分： 通常将组织培养过程划分为四个阶段 1、起始培养阶段（诱导阶段） 2、增殖培养阶段 3、生根培养阶段 4、驯化移栽; Stage 0 – Selection preparation of the mother plant sterilization of the plant tissue takes place Stage I ?- Initiation of culture explant placed into growth media Stage II - Multiplication explant transferred to shoot media; shoots can be constantly divided Stage III - Rooting explant transferred to root media Stage IV - Transfer to soil explant returned to soil; hardened off;;二、外植体起始培养（无菌体系建立） 起始培养阶段是指无菌体系的诱导和建立过程。主要受外植体、培养基、环境条件等因素的影响。;（一）外植体的起始培养过程 1、 起始培养的一般过程： A、选取适宜的基因型（品种）； B、选取适宜的外植体；常用外植体有茎尖、茎段、节间、叶片、叶柄等。 C、流水冲洗外植体； D、外植体切割、分离及灭菌处理； E、外植体接种于诱导培养基。 F、环境条件控制促进外植体的生长。;2、接种外植体的生长过程： A 细胞分裂的启动； B 细胞增殖； C 组织和器官的形成。 ;;（二）影响外植体起始培养的因素： 1、影响外植体起始的因素 A 外植体的遗传基础及生理影响 B 培养基组成成分：矿物盐类、微量有机成分、生长调节物质、碳源、琼脂、活性炭、酚类化合物、多胺等。 C 培养条件：光照、温度、湿度 ;A 外植体 (1) 外植体种类及基因型 (2) 外植体供体植株和外植体的来源与生理状态 (3) 外植体大小 (4) 外植体的极性;外植体种类及基因型;单子叶植物不易诱导器官发生。 b. 木本植物较难诱导。 c. 存在基因型差异（如番茄29%~63%） d. 开始生长季节取材容易诱导。;外植体状态：;外植体大小： 外植体越小成苗能力越弱，较大的外植体增殖较快。 外植体极性： 当外植体以形态学的基部接种于培养基上时，从远离基部的表面诱导出芽、苗数目较多。;;B、培养基 a 培养基类型: b 碳 源的影响: ; C、植物生长调节物质 a 细胞分裂素和生长素类 b 赤霉素类 c 乙烯及其生物合成抑制剂 d 其他有机化合物;细胞分裂素和生长素：;a.部分植物单独使用细胞分裂素（CTK）可以形成 无根苗 b.部分植物无根苗的形成需要细胞分裂素和生长素配合使用。 c. 外源CTK与生长素必须维持适当比例以改变内源激素平衡，促进器官发生。 d. 不同细胞分裂素对分化的作用效果不同 e. 苯基脲衍生物具有较高的细胞分裂素活性 （4PU、CPPU 、TDZ）;赤霉素类： 赤霉素与促进细胞伸长和开花反应，组织培养条件下只在少数植物上对芽的诱导有促进作用。 如马铃薯、甜菜、樱桃等。 乙烯及其生物合成抑制剂： 具有促进和抑制两方面的影响，但抑制作用多于促进作用。因此在某些植物种类，乙烯抑制剂可以促进芽的形成。 AgNO3 、CoCl、AVG ;其他有机化合物： 腺嘌呤衍生物具有促进器官分化作用。 椰子汁等物质也具有促进分化的功能。;3. 培养条件及其他因素 （1）光照 通常1000~5000 Lx 16 小时光照。 非洲菊1000 lx ，洋葱 16小时，马铃薯连续光照，葡萄要求短日照。 光质也影响芽的再生，蓝光有利于器官发生，烟草实验，而红光有利于根的发生。 ;（2）温度 大部分植物要求25 oC，少数要求较低温度（15 ~ 20 oC）或较高的温度（30 oC ） 如菖蒲、水仙、洋葱、龟背竹等。 变温处理对有些植物器官发生有促进作用，如豌豆。 ;（3）湿度： 培养室相对湿度以70％－80％为适宜，培养容器内要保持适宜湿度，防止过于干燥或湿度过大。 （4）气体： 要注