试验七荧光显微镜及激光扫描共聚焦显微镜使用.pptVIP

* 实验七-1 细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用 （示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用） 实验目的与教学要求 掌握荧光显微镜的成像基本原理及其使用； 掌握暗视野显微镜的成像基本原理及其使用。 荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 一、荧光显微镜的成像原理 什么是荧光 ? 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。 即：物质吸收短波光，发射出的长波光。 保持固有的荧光特性 荧光波长＞激发波长 荧光强度极小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 荧光的性质 优点： 检出能力高 对细胞的刺激小 能进行多重染色 用途： 物体构造的观察 荧光的有无、色调比较进行物质判别 发荧光量的测定对物质定性、定量分析 荧光显微镜的优点和用途 荧光素的特性 对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。 作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。 荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用 二、暗视野显微镜的成像原理 通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照射到样品上，由样品表面的绕射光线入射到物镜内，产生样品的衍射图象。 三、试剂与器材 青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪