第11章酶的定向催化.pptVIP

下载本文档

3
0
约小于1千字
约 35页
2019-07-23 发布于福建
举报
版权申诉

第11章酶的定向催化.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

Directed enzyme evolution;一、自然进化与定向进化;2、定向进化;3、定向进化的一般过程;4、酶定向进化的意义;二、酶分子定向进化的历史;1981年，B.G.Hall等定向改变E.coliK12中ebg酶的底物专一性，开发出对几种糖苷键有水解能力的酶。 1993年，Arnold研究组提出易错PCR的方法。 1994年，Stemmer将DNA重组方法引用到酶分子的定向进化中。 2019年，Stemmer等把DNA改组延伸到族改组。;三、酶分子的定向进化;1、定向进化的过程;2、多样性的产生;（1）易错 PCR(error-prone PCR);（2）连续易错 PCR(Sequential error-prone PCR);（3）DNA改组技术(DNA shuffling);（a)单个基因的DNA改组;DNA改组与常规定向进化的比较;（b) 基因家族改组技术(family shuffling);(c ) DNA改组原理;（d）随机引物体外重组法(RPR);（e）交错延伸原理;采用基因家族的改组效果明显高于单个基因的改组效果。特点：改组基因的效率高；提高基因突变机率。 ;??、基因文库的构建;2、突变体基因的构建策略;3、构建突变基因文库的载体系统;（2）质粒载体系统载体选择基因重组组装突变基因文库。体外操作简便，载体本身的设计上有很大可塑性；最大优点是能实现对基因文库的功能性筛选；缺点是插入片段的载体容量较小，含有长片段的重组克隆在文库的群体扩增过程中容易丢失；转化效率普遍较低；不适合文库的长期保存。;4、文库的筛选;5、定向进化的筛选;6、高通量筛选技术;（2）酶活力检测;（3）噬菌体显示筛选模式;（4）pH指示剂显色高通量筛选;（5）产物显色筛选;（6）荧光产物筛选;（7）基于比色法和荧光检测的高通量筛选;六、酶定向进化技术应用;