兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的小鼠免疫效果分析.DOC

PAGE 1076 中 国 农 业 科 学 40卷 5期 顾宏伟等：兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的小鼠免疫效果分析 PAGE 1075 中国农业科学 2007, 40(5):1073-1078 Scientia Agricultura Sinica 收稿日期：2005-04-04；接受日期：2007-01-09 基金项目：国家“973”项目（G1999011906） 作者简介：顾宏伟（1978-），男，江苏如东人，博士，研究方向兽医微生物学与免疫学研究。通讯作者陆承平。Tel：025E-mail：lucp @njau.edu.cn 兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的小鼠免疫效果分析 顾宏伟，陆承平 （南京农业大学农业部疾病诊断与免疫重点开放实验室，南京　210095） 摘要：【目的】本试验以小鼠为动物模型，比较了兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白（IROMPs）的免疫原性及分析交叉免疫保护效果。【方法】分别以正常培养基和限铁培养基增殖兔多杀性巴氏杆菌C51-12和C51-3，采用Sarcosyl沉淀—超离法提取IROMPs和OMPs，并用SDS比较两株之间的差异，同时用正常培养基增殖该菌制备灭活全菌抗原。免疫原性分析，将清洁级小鼠20只随机分成4组，5只/组，以C51-12株的全菌、IROMPs和OMPs作抗原分别免疫，采用间接ELISA检测免疫小鼠的相应抗体动态变化；免疫保护试验，分别采集经4次免疫后小鼠的抗血清，作1﹕10稀释腹腔注射小鼠，每组6只，18 h后用C51-12和 C51-3分别攻毒，比较上述抗血清所提供的交叉免疫保护力。【结果】前21 d，抗体滴度以全菌免疫组抗体滴度较高，随后IROMPs免疫组反超。最终抗体滴度：IROMPs组＞OMPs组＞全菌组。被动免疫时全菌抗血清和OMPs抗血清能够抵抗C51-12株攻毒，但对C51-3株提供的保护力较差；C51-12株攻毒，IROMPs抗血清组能够全部保护，C51-3株攻毒，5/6获得保护。【结论】IROMPs在小鼠动物模型中具有一定的交叉保护力，为进一步研究交叉保护因子奠定基础。 关键词：多杀性巴氏杆菌；家兔；免疫原性；铁调节外膜蛋白 Evaluation of the Immunization of Iron-Regulated Outer Membrane Proteins (IROMPs) of Leporid Pasteurella multocida in Mice Model GU Hong-wei，LU Cheng-ping ( Key Lab Animal Disease Diagnostic Immunology, Ministry of Agriculture,Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095) Abstract: 【Objective】To evaluate the diversity of immunogenicity of IROMPs, OMPs and whole-cell bacterin (WCB) of leporid P. multocida, and evaluate their cross protection in mouse model. 【Method】 20 mice were equally assigned to 4 groups at random. They were immunized by IROMPs, OMPs and WCB respectively. The indirect ELISA was used to detect antibody responses. After two months post-vaccinationl, the antisera to these three immunogens and normal serum were collected and diluted with sterile physiological saline (1﹕10 V/V). Then 48 mice were equally assigned to 8 groups at random, each group was given cognat antisera by intraperitoneal injection, group a and b, antisera to IROMPs; group c and d, antiser