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新生的肌肉生长抑制素基因单侧敲除猪肌肉特性的研究 摘要 子，对骨骼肌的生长具有抑制作用。MSTN基因自然突变的现象已经在牛、羊、 狗等动物中发现，均表现为肌肉肥大。研究发现，MSTN基因突变能够增加卵泡 抑素基因(Follistatin)的表达水平，并潜在地改变肌肉中肌纤维类型的分布和肌 球蛋白重链的表达水平。目前，MSTN基因单侧突变动物的研究相对较少。猪作 为研究人类骨骼肌生理功能最适宜的动物模型，其解剖学和生理学特性与人类是 非常相似的。因此，本研究结合体细胞核移植和胚胎移植技术，利用已建立好的 基因单侧敲除对猪半腱肌和半膜肌的肌肉重量、肌纤维横断面积和数量、肌纤维 类型的分布以及肌球蛋白重链亚型的表达的影响。主要实验内容及结果如下： l、生产MSTN+／-猪。利用已通过转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN) 打靶技术建立的MSTN基因单侧敲除猪胎儿成纤维细胞系(MSTN基因单链缺 胞获得的重构胚胎对比，二者具有相似的分裂率、囊胚形成率和囊胚细胞数。将 侧敲除降低新生猪半腱肌和半膜肌中的MSTN基因的表达水平，并提高 Follistatin基因的表达水平(P0．05)。 2、检测新生的MSTN¨猪半腱肌和半膜肌的组织形态学特性。取材发现， MSn一猪的半腱肌和半膜肌的肌肉横断面积较WT猪大。与WT猪相比， MSTN¨猪两种肌肉的绝对肌肉重量和相对肌肉重量均明显提高(PO．05)。对新 生的MSTN¨猪和WT猪的半腱肌和半膜肌组织切片进行苏木精伊红染色，在 MSTN¨猪中，两种肌肉的肌纤维横断面面积明显高于WT猪，但MSTN“猪和 WT型猪半腱肌和半膜肌的肌纤维数量均无显著性差异。结果表明，新生的 MSrn一猪肌肉质量的提高，主要是MSTN单侧敲除使肌纤维肥大导致的。 3、观察肌纤维类型的分布。试验利用免疫荧光染色法标记肌球蛋白重链I 型蛋白，在MSTN¨猪中，半腱肌和半膜肌慢肌纤维比例明显低于WT猪 (P0．05)。进一步进行琥珀酸脱氢酶染色，发现在相同条件下染色，MSTN¨ 猪两种肌肉与WT猪相比呈现更低的琥珀酸脱氢酶活性，可推测MSTN¨猪拥有 万方数据 新生的肌肉生长抑制素基因单侧敲除猪肌肉特性的研究 更多的快酵解型肌纤维。结果表明，MSTN基因单侧敲除能够改变新生猪肌纤维 类型的分布，提高快酵解型肌纤维的比例。 4、比较肌球蛋白重链亚型的表达水平。试验通过实时定量PCR方法，检测 MSTN“猪的半腱肌和半膜肌中肌纤维类型相关基因，肌球蛋白重链I型 仅在半腱肌中高于WT猪，说明MSTN+／-猪肌纤维类型向快酵解型纤维转变。 上述结果表明，猪MSTN单侧敲除重构胚具有与wT供体细胞重构胚具有 相似的体内外发育能力，MSTN单侧敲除能够显著降低新生猪半腱肌和半膜肌的 体重、半腱肌和半膜肌的肌肉重高于WT猪，主要是由于MSTN单侧敲除增加 肌纤维大小导致的。除此之外，MSTN单侧敲除改变新生猪半腱肌和半膜肌肌纤 维类型的分布，提高快肌纤维的比例和肌球蛋白重链IIB型基因的表达量，降低 琥珀酸脱氢酶的活性，使肌纤维类型向酵解型纤维转变。 关键词：猪；肌肉生长抑制素；单侧敲除；快酵解型肌纤维；肌球蛋白重链 亚犁 Ⅱ 万方数据 新生的肌肉生长抑制素基因单侧敲除猪肌肉特性的研究 Abstract a conserved ofskeletalmuscle Myostatin(MSTN)ishighly negative regulator growth mutationsintheMSTNhave development．Naturally-