三甲沙林8-甲氧基补骨脂素甲氧基补骨脂素.DOC

PAGE PAGE 1 附件16： 化妆品中呋喃香豆素类 （三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素） 和欧前胡内酯的检测方法 1 适用范围 本方法规定了用高效液相色谱法测定化妆品中呋喃香豆素类（三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素）和欧前胡内酯的方法。 本方法适用于化妆品中呋喃香豆素类（三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素）和欧前胡内酯含量的测定。 2 方法提要 样品在经过提取后，用高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，经与平行操作的三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素和欧前胡内酯对照品比较，以保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。必要时，采用液相色谱-质谱方法（LC-MS/MS）进行确证。本方法对三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素和欧前胡内酯的检出限、定量限和取样品0.5 g时的检出浓度、定量浓度见表1。 表1 4种香豆素类成分的检出限和检出浓度 化合物 检出限 （ng） 定量限 （ng） 检出浓度 （μg/g） 定量浓度 （μg/g） 三甲沙林 0.13 0.25 0.26 0.50 8-甲氧基补骨脂素 0.13 0.27 0.26 0.54 5-甲氧基补骨脂素 0.05 0.26 0.10 0.52 欧前胡内酯 0.15 0.29 0.30 0.58 3 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。 3.1 甲醇，色谱纯。 3.2 三甲沙林，纯度≥99%。 3.3 8-甲氧基补骨脂素，纯度≥98%。 3.4 5-甲氧基补骨脂素，纯度≥99%。 3.5 欧前胡内酯，纯度≥99%。 3.6 混合标准储备溶液 [（待测成分）=10 μg/mL]：分别称取三甲沙林（3.2）、8-甲氧基补骨脂素（3.3）、5-甲氧基补骨脂素（3.4）和欧前胡内酯（3.5）对照品各5 mg（精确到0.1 mg），置5 mL量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，配置成质量浓度各为1 mg/mL的标准溶液。精密量取各标准溶液0.5 mL置50 mL量瓶中，加甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀，即得10 μg/ mL的混合标准储备溶液。 3.7 系列浓度标准溶液：精密量取一定体积的混合标准储备溶液（3.6），置10 mL量瓶中，加甲醇（3.1）稀释至刻度，配制得各待测成分的质量浓度分别为0.05 μg/ mL、0.1 μg/ mL、0.5 μg/ mL、1.0 μg/ mL、5.0 μg/ mL、10.0 μg/ mL的系列浓度标准溶液。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：具二极管阵列检测器。 4.2 液相色谱-三重串联四级杆质谱联用仪。 4.3 分析天平：感量为0.1 mg。 4.4 移液器。 4.5 涡旋振荡器。 4.6 超声波清洗仪（功率不低于200W）。 4.7 高速离心机：转速不小于10000 r/min。 5 测定步骤 5.1 样品预处理 膏、霜、乳类：称取0.5 g（精确至0.1 mg）样品，置10 mL量瓶中，加6 mL甲醇（3.1），涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20 min，放至室温，加甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀，转移至10 mL具塞塑料离心管中，以12000 r/min离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液备用。 液体类：称取0.5 g（精确至0.1 mg）样品，置10 mL量瓶中，加甲醇（3.1）稀释至刻度，混匀，必要时，转移至10 mL具塞塑料离心管中，以12000 r/min离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液备用。 固体粉类：称取0.5 g（精确至0.1 mg）样品，置10 mL量瓶中，加8 mL甲醇（3.1），混匀，超声提取20 min，放至室温，加甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀，静置，必要时，转移至10 mL具塞塑料离心管中，以12000 r/min离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液备用。 若样品中被测成分的浓度超过了线性范围的上限，需对待测溶液进行适当稀释处理。 5.2 高效液相色谱参考条件 色谱柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm 流动相：甲醇＋水，梯度洗脱，洗脱程序见表2。 表2 流动相甲醇和水梯度洗脱程序（体积比） 时间/min 0 15 16 19 20 甲醇＋水 70＋30 90＋10 100＋0 100＋0 70＋30 注：梯度洗脱条件，操作者可根据样品的不同选择最佳条件，使待测成分与其他组分峰获得完全分离。 流速：1.0 mL/min。 检测波长：248 nm。 柱温：30 进样量：10 μL。 5.3 样品测定 按设定的色谱条件（5.2），取系列浓度标准溶液（3.7