动物细胞的工程制药概述.pptVIP

第四章 动物细胞制药（一） 第四章 动物细胞工程制药 （一） 一、概述 1665 年，虎克用自制的显微镜发现了细胞。细胞是一切动植物体结构和功能的基本单元，并创立了细胞学说。 组织培养或细胞培养是将组织或细胞从机体取出，在体外模拟机体体内生理条件进行培养，使之生存和生长，已有近百年历史了。 随着细胞生物学、分子生物学、生物化学和基因工程等一系列学科和技术的发展，逐渐形成了细胞工程学。 细胞工程 以细胞为单位，按人们的意志，应用生物学、分子生物学等理论和技术，有目的地进行精心操作，使细胞的某些遗传特性发生改变，从而达到改良或产生新品种的目的； 使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的能力，从而在离体条件下进行大量培养、增殖，并提取出对人类有用的产品。 细胞工程 细胞工程包括： ◆ 真核细胞的基因重组、导入、扩增和表达的理论和技术 ◆ 细胞融合的理论和技术 ◆ 细胞器特别是细胞核移植的理论和技术 ◆ 染色体改造的理论和技术 ◆ 转基因动植物的理论和技术 ◆ 细胞大量培养的理论和技术 ◆ 有关产物提取纯化的理论和技术 二、动物细胞的形态和生理特点 动物细胞的特点 动物细胞属于真核细胞，结构复杂，分化精确，不同细胞执行不同的功能 。 细胞在离体培养时形态会发生变化。 将离体培养的细胞分为两类：贴壁依赖型和贴壁非依赖型，或贴壁细胞和悬浮细胞。 贴壁细胞 生长时必须要有给以贴附的支持物表面。 细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长和繁殖。 细胞在表面上生长时有两种形态，成纤维样细胞型和上皮样细胞型。 成纤维样细胞型：主要来源于中胚层组织细胞、心肌细胞、平滑肌细胞成骨细胞等。 上皮样细胞型：主要来源于外胚层和内胚层组织细胞，皮肤细胞、肠管上皮细胞，在培养过程中，随着培养条件的变化细胞形态也会发生改变。 悬浮细胞 、兼性贴壁细胞 悬浮细胞：生长不依赖支持物表面，在培养液中悬浮生长，如淋巴细胞等。 兼性贴壁细胞：根据生长条件的不同可贴壁也可悬浮生长，如中国地鼠卵巢细胞。 动物细胞的生理特点 分裂期长：12-48 小时，同一种属不同部位的细胞也不相同，分裂期受培养条件的影响如温度、酸度、成分等。 细胞的分裂： 周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M） 动物细胞的生理特点 G1期：4～6h 合成DNA聚合酶 RNA合成 S期： 6～8h DNA合成 G2期：2～5h DNA量加倍, RNA合成 M期：0.5～1h 染色体分裂 动物细胞的生理特点 细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象 ：生长都需在一定的基质上贴附（二倍体细胞的特点）。 细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片时，即细胞与周围细胞接触时，细胞就停止增殖— 接触抑制。 若细胞转化成异倍体后，该抑制可解除。 动物细胞的生理特点 寿命有限：正常二倍体细胞传代培养大约在50 代左右，然后细胞就会逐渐死亡。 在培养基中加入表皮生长因子或经自然和人为的因素转为异倍体后该细胞可转变成无限细胞系，更适合于工业生产。 动物细胞的生理特点 对周围环境十分敏感： 物理化学因素，如渗透压、酸度、离子浓度、剪切力、微量元素等的变化都会影响其生长。 原因：动物细胞没有细胞壁的保护。 动物细胞的生理特点 对培养基要求很高：原核生物只要有碳源、氮源和无机盐就可以生长。 动物细胞不仅需要12种必需氨基酸、8 种以上维生素、多种无机盐和微量元素、葡萄糖外，还需要多种细胞生长因子和贴壁因子。 动物细胞的生理特点 动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同：动物细胞蛋白质的合成在游离和粗面型内质网上都可以进行。 内质网上合成的蛋白质多数为糖蛋白，需要糖基化 细菌细胞则没有糖基化过程。 动物细胞作为宿主细胞生产药物的优、缺点 缺点：培养条件要求高、成本高、产量低； 优点：多半可分泌到细胞外，提取纯化方便，蛋白质经糖基化修饰后与天然产物更一致，适合于临床应用。 三、生产用动物细胞的要求和获得 要求：原代细胞、二倍体细胞、转化细胞。 获得：原代细胞、已建立的二倍体细胞系及可无限传代的转化细胞系。 原代细胞 直接取自动物组织、器官，经过粉碎、消化后获得的细胞悬液（109/g） 。 需大量动物，费钱费劳力。 鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞。 二倍体细胞 原代细胞经过传代、筛选和克隆，从而从多种细胞成分的组织中挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。 特点：染色体组型是2n核型；有明显的贴壁和接触抑制特性；有限的增殖能力（可传代培养50代）；无致瘤性。 转化细胞系 通过转化形成，变成了异倍体，有无限增殖能力。 转化可自发，在传代过程中自己转变成可无限增殖的细