基因工程第六章外源基因的表达.pptVIP

第六章 外源基因的表达 6.1 基因表达机制 6.1.1 外源基因的起始转录 是基因表达的关键 转录应被调节, 启动子应为诱导型(lac trp tac 等启动子) 6.1.2 mRNA延伸和稳定性 转录启始后, mRNA的延伸、终止及其稳定便成为关键阶段。 mRNA 应在细胞中保持稳定的拷贝数。 ?6.1.3 mRNA 的翻译 mRNA有效翻译需考虑的基本原则： AUG（ATG）为起始密码子 SD 序列应包括AGGAGG中的4个. SD 序列与起始密码子间距3-9bp 起始区周围序列无二级结构. 外源基因的主密码子与受体细胞的相同或接近. 主密码子:基因组中使用频率高的密码子 罕用密码子:使用频率低的 终止密码: E.coli. 一般用UAA. RF1识别UAA, UAG. RF2识别UAA, UGA. 6.1.4 表达蛋白的稳定性 避免表达蛋白降解的方法: ① 采用融合蛋白表达系统 ② 采用分泌蛋白表达系统 ③ 构建包涵体表达系统 ④ 选择无蛋白水解酶的受体。 6.1.5 目的基因沉默 基因沉默（gene silencing) 其作用机制主要有三种： 位置效应的基因沉默：整合入甲基化程度高、转录活性低的异染色体上，一般不表达。 转录水平的基因沉默：启动子的甲基化或外源基因的异染色质体。 转录后水平的基因沉默：RNA水平上, 基因可转录,但mRNA合成