基因工程第七章 DNA定点诱变.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * B. 多处缺失或变换2个bp以上的oligo 两侧需12-15bp 侧翼双链区的Tm应约为35-40℃ Tm=4(G+C)+2(A+T) =36℃ ( 3 each) 突变区域大, 效率越低(两侧形成稳定杂交体的能力是突变区长度的函数→ 越低） 5. 模板/结果 靶DNA尽可能短，应测序确定其突变 二、Altered Sites ? II in vitro mutagenesis system 位点选择定点诱变法 三、Transformer Site-Directed mutagenesis 转化子诱变法 Synthesize second strand Digest DNA (primary digestion) Transform E.coli mutS to propagate plasmids Isolate and digest (Second digestion) Transform E.coli Isolate DNA 四 、 PCR定点诱变 1．同源重组法 2．DpnI法 3.重叠延伸 Overl