第九章环境毒理学常用实验方法.pptVIP

四、哺乳动物的急性毒性实验 （二）急性阈剂量的测定 1.观察指标的选择 应根据毒物和实验动物的特性采用不同的生理、生化及形态学的指标。 （1）对于新化学物质，首先选用整体状态及非特异性作用指标，如活动能力、应激状态、条件反射等。 （2）对于毒作用特点比较清楚的毒物，可选择该毒物作用引起最敏感反应指标，如有机磷农药可选胆碱酯酶活性变化。 （3）对于刺激性气体和蒸气，可测定其刺激阈浓度或嗅觉阈浓度。 急性毒性试验 四、哺乳动物的急性毒性实验 （二）急性阈剂量的测定 2.实验方法 （1）游泳试验 主要是通过观察动物的活动能力，揭示不同剂量的毒物对机体体力影响的程度，是研究阈剂量(或浓度)的常用指标。 实验动物一般用小鼠或大鼠。 记录每只动物自放入水中至口鼻沉没到水下5秒钟的时间，即游泳时间。在游泳过程中记录游泳速度、运动姿势等。 比较染毒组与对照组游泳时间和速度以及游泳姿势上的差异并进行评价。 急性毒性试验 四、哺乳动物的急性毒性实验 （二）急性阈剂量的测定 2.实验方法 （2）刺激阈试验 刺激性气体或蒸汽，对上呼吸道、眼睛和口腔等器官的黏膜会产生局部刺激作用，通过观察毒物在不同浓度下引起的刺激症状，可找出毒物引起刺激症状的最低浓度，即阈浓度。 实验动物多用猫。 观察指标除一般刺激症状，如流泪、流涕、等以外，主要观察动物的流涎出现的时间及严重程度。 将50％以上动物出现“有少量唾液流到口唇周围”以上程度的刺激症状的最小浓度作为阈浓度。 急性毒性试验 四、哺乳动物的急性毒性实验 （三）局部作用试验 用于研究一些化学物质引起接触的皮肤和黏膜的症状，如炎症和烧伤。 1.急性皮肤刺激/腐蚀试验 为了确定化学物质对哺乳动物的皮肤是否具有刺激或腐蚀作用。 选用白色豚鼠或家兔作为实验动物。 观察涂抹部位的皮肤反应，对刺激作用给予全面完整的评价。 急性毒性试验 四、哺乳动物的急性毒性实验 （三）局部作用试验 2.急性眼睛刺激/腐蚀试验 结膜囊染毒试验。 试验常选用家兔或豚鼠为实验动物。 将受试化学物0.1mL滴人一侧眼结膜囊内，用手将眼睑压住，使闭眼几秒钟，另一侧眼滴生理盐水作对照。 记录滴药后1h、12h、24h、48h、72h和96h的局部反应，如充血、水肿、流泪、怕光、角膜、结膜和眼球损害的程度以及恢复的时间等。 以规定的间隔时间观察刺激或腐蚀作用的程度，同时作进一步描述以便对刺激作用给予全面、完整的评价。 急性毒性试验 五、水生动物毒性实验 一些水生生物对水质变化很敏感，反应显著。因此，在环境毒理实验中常用水生生物作为实验动物，特别在制订污水排放标准时，常进行水生生物的急性毒性实验。 鱼类、甲壳动物、藻类毒性实验等方法。 急性毒性试验 鱼类毒性实验 1. 实验用鱼的选择 必须具有一定区域代表性，便于在实验条件下饲养，对化学物质较为敏感。 短期试验多采用我国的青、草、鲢、鳙四大养殖淡水鱼，一般体长7cm。 较长期的试验多采用金鱼，一般在3cm以下，体长最长不应超过最小体长的1.5倍。 选择行动活泼、体色光泽、鱼鳍完整舒展、逆水性强和食欲好的健康鱼，在实验室内观察一周后使用。 急性毒性试验 鱼类毒性实验 2. 实验条件 实验容器采用玻璃缸或白搪瓷桶，其盛水量以每条鱼2～3L水为宜。 水的pH值为6.7～8.5，冷水温度为12～18℃，温水温度为20～28℃，水温变化为±2℃。 水中溶解氧不能低于4 mg/L，可用清洁的河水、湖水或放置3d以上的自来水。 急性毒性试验 鱼类毒性实验 3. 半数耐受浓度的测定 半数耐受浓度或半数存活浓度的测定试验设计与哺乳动物的LD50测定基本相同。 先通过预备试验确定100％致死浓度和不引起死亡的最大浓度，然后以此浓度范围，按l﹕(0.65-0.9)的等比级数确定5-7个浓度组，另加一空白对照组，每组10-20尾鱼，染毒48-96h。 染毒开始头8h经常观察，以后可作24h、48h、72h、96h的定期观察，记录中毒反应及死亡时间。死亡鱼立即取出剖检。 试验期间水环境(DO、pH、水温)稳定。 根据24h、48h、96h各组鱼的死亡数，按LD50计算方法，求出相应时间的TLm。 急性毒性试验 鱼的急性毒性实验设计 设计有机磷农药—乐果对鱼的急性毒性实验 六、发光细菌急性毒性试验 基本原理： 发光细菌在干净水体中发光恒定，当受到污染物影响时，发光受到抑制，受抑制的程度与水体中毒物的总体浓度及毒性大小有关，故用发光光度计测定其发光强度，即可评估该水样的毒性。 急性毒性试验 梨形四膜虫(原生动物)毒性试验 进行药物、有机物、无机物及水污染物毒理学评价 蚯蚓急性毒性试验 土壤环境毒理学试验的