基因工程常规技术-聚合酶链式反应.pptVIP

扩增两个引物外侧的未知序列 （2）反向PCR 把线性DNA模板转变成环形分子。 template template 3’ 5’ 5’ 3’ （传统PCR只扩增两个引物之间的已知序列）。 技术关键： * 使引物的外侧序列 “转变” 成内侧序列。 * 扩增RNA模板。如mRNA或RNA病毒。 （3）反转录PCR（RT-PCR) Temin,H.发现反转录酶， 1975诺贝尔奖 技术关键： 利用反转录酶，把RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增。 * RNA template 3’ 5’ 下游引物 cDNA first strand 3’ 5’ 上游引物 cDNA first strand cDNA second strand 3’ 5’ 3’ 5’ 反转录酶 Taq酶 PCR Reverse transcription (RT) 下游引物 上游引物 Taq酶 * 基因、DNA片段的克隆 人工基因构建 基因定点突变 基因突变检测， SNP分析，遗传背景分析 生物物种鉴定，系统进化研究 基因表达量研究 …… PCR的应用 * * * * /chemistry/laureates/1993/mullis-lecture.html /chemistry/laureates/1993/mullis-autobio.html Mulli