遗传实验人类染色体组型分析.pptVIP

实验一 人类染色体组型分析 一、实验原理 组型(核型,karyotype) 是将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像. 通常以模式图的方式表示,它是通过对许多细胞染色体的测量取其平均值绘制而成的,代表了一物种染色体组型的特征.由于染色体是遗传物质单位——基因的载体,组型代表了种属的特征.所以组型分析对于探讨人类遗传病的机制等方面具有重要意义. 二、实验目的 掌握染色体组型分析的各种数据指标 学习染色体组型分析方法 制作人类染色体组的核型图片 三、染色体的特征 数目 （2n=？） 长度 （绝对长度、相对长度） 着丝粒位置 （M\SM\ST\T） 随体与次溢痕的数目、大小和位置 带型分析 四、应用意义 染色体组型分析——染色体水平上的表型 可确定物种的特征，确定种属亲缘关系 分析生物物种的变异和进化过程 识别单条染色体、基因定位 临床应用（染色体疾病、产前诊断） 每一个中期染色体均由两条染色单体构成，每一条染色单体由一个DNA分子螺旋而成。 两条染色单体互称为姐妹染色单体。两条染色单体通过一个着丝粒彼此连接。着丝粒将染色体分为两臂，长臂（q）和短臂（p）。 如何获得中期染色体? 染色体形态测量数据 2、人类染色体形态 3、人类的正常核型 核型的描述 染色体总数，性染色体 正常男性 46? ，XY 正常女性 46 ，XX 染色体显带 染色体显带：经不同的方法处理染色体，经染色后使染色体在纵轴上显示明、暗或着色深、浅相间的横纹即显带（Banding）。 这种带对每一条染色体来说都是独特的，可以区分和确认每一条染色体。 4、人类染色体的带型 G-Banding G带 先经盐,碱,热,胰酶或蛋白酶,尿素及去垢剂等处理后,再用Giemsa染液染色 Q-Banding (Quinacrine) Q带 缺点：荧光持续存在的时间很短 ，必须有荧光显微镜才能进行观察 R-Banding R带 中期染色体不经盐酸水解或不经胰酶处理的情况下，经吉姆萨染色后所呈现的区带 所呈现的是G带染色后的带间不着色区，故又称反带 C带 将中期染色体先经盐酸，后经碱（如氢氧化钡）处理，再用吉姆萨染色 C带的形成是高度重复序列的DNA（异染色质）经酸碱变性和复性处理后，易于复性，而低重复序列和单一序列DNA（常染色质）不复性，经Giemsa染色后呈现深浅不同的染色反应。这种差异反映染色体结构的差异 T带 又称端粒带，是染色体的端粒部位经吉姆萨和吖啶橙染色后所呈现的区带，典型的T带呈绿色。 单色FISH 染色体着丝粒荧光 染色体端粒荧光 多色FISH的组型分析（24种染色） 四、实验器材 人染色体显微照片,剪刀,镊子,胶水. 五、本实验的步骤 1.同源染色体配对编号:按图片上的染色体大小,形态,着丝粒位置,随体有无,进行同源染色体配对,将染色体分为22对常染色体和一对性染色体.编号为1-22号,性染色体编号为23号. 2.分组:将大小,形态,着丝粒位置相近的染色体归为一组,一般分为A-G的7个组，每组3对染色体。 3.粘贴:在实验报告纸上划8条横线,用剪刀按编号将图片上的染色体分别剪下,分组排列粘贴在横线上.如A组排列1-3对染色体,C组排列6-12对染色体等.性染色体单独排列在一条线上. 各组染色体主要特征: 正常男性— 46, XY 正常女性— 46, XX Trisomy 21 (47,XY,+21) – DownSyndrome Trisomy 18 (47,XY,+18) – EdwardSyndrome Trisomy 13 (47,XY,+13) – PatauSyndrome Klinefelter Syndrome 睾丸退化症 1942年核型一般为47 XXY,少数为48XXXY 卵巢退化症(Turners syndrome)　1939年核型一般为45 XO,此外还有XO/XX嵌合体 作业:交一幅人类染色体组型分析图 细胞培养与染色体制备 正常人外周血或细胞 RPMI1640培养基+15%小牛血清=5ml 370C，培养68 hr 加秋水仙素，培养2～4 hr（抑制细胞分裂） 收集细胞 离心，去上清液（1000rpm/10 min） 低渗处理，0.075 M KCI，370C，25min 预固定，甲醇：冰醋酸=3：1 离心，去上清液（1000rpm/10 min） 重复固定三次 制片，