细菌基因组DN提取试剂盒（离心柱型）.docVIP

细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱型） GK4003-10 GK4003-20 GK4003-50 GK4003-100 一.试剂盒组成 Components GK4003-10 10 Preps GK4003-20 20 Preps GK4003-50 50 Preps GK4003-100 100 Preps GenClean Column 2.0-ml Collection Tube Digestion Solution(a) NPB Solution AW1 Solution(b) AW2 Solution(c) AE Buffer(d) TE(pH8.0) Boiled RNase A Proteinase K(f) Lysozyme(g) SP Buffer protocol 10 10 4 ml 1 ml 6 ml 3 ml 3 ml 2 ml 50 μl 30 μl 5 mg 1.0 ml 1 20 20 10 ml 2 ml 12 ml 8 ml 8 ml 4 ml 240 μl 250 μl 15 mg 1.0 ml 1 50 50 25 ml 5 ml 30 ml 20 ml 20 ml 10 ml 480 μl 500 μl 30 mg 1.0 ml 1 100 100 50 ml 10 ml 60 ml 40 ml 40 ml 20 ml 120 μl 1000 μl 60 mg 1.0 ml 1 *Proteinase K使用前，每管加入1 ml 无菌水溶解，混匀，分装后-20℃保存。 Digestion Solution低温时可能出现结晶，请于37℃温育溶解摇匀后使用，不会影响产率。 首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。 (c) 首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。 (d) AE Buffer为10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5pH8.5。TE(pH 8.0)或者水（pH7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。 (f)不得将Proteinase K直接加到Digestion Solution中，以免酶失活。 (g) Lysozyme使用前加入按5 mg溶于100μl计算，溶于SP Buffer，溶解后，分装于-20℃冻存。 客户自备：PBS缓冲液，胰蛋白酶，无水乙醇 运输 储存温度 运输 室温 储存 Proteinase K , Lysozyme , Boiled RNase A : -20℃ 其他 室温 二．主要用途 从细菌和各种培养细胞中小规模抽提基因组DNA。 三．主要特点 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，重复性好。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 3.快速，简捷，单个样品操作一般可在50分钟内完成。 4.多次柱漂洗确保提取细菌基因组的高纯度，OD260/280nm典型的比值达1.7～1.9，长度可达50～100kb，可直接用于PCR， Southern-blot和各种酶切反应。 四．培养细胞与细菌样品准备 1．培养细胞的准备 (1) 对于悬浮培养细胞： 1,000g室温离心5分钟，彻底去除上清。 (2) 对于单层培养细胞：吸去培养基，用PBS洗涤细胞，然后用胰蛋白酶消化细胞。当细胞从培养瓶表面脱落以后，将细胞转移到离心管中，1,000g室温离心5分钟，彻底去上清。 (3) 将离心去上清的细胞用150μl TE(pH8.0)悬浮。 处理细胞可达1×106～5×107个，增加处理细胞数量，请相应增加处理时间。 2．细菌样品的准备 (1) 将适量的指数生长期细菌（最多可达5×108细菌，约0.5 ml过夜培养菌液），8,000rpm，离心1分钟，彻底弃净培养基。 (2) 加入150μl TE(pH8.0)悬浮细菌，按照下表中的要求加入Lysozyme溶液，用吸头混匀，对于革兰氏阳性和革兰氏阴性菌酶解时间的要求是不一样的，详见下表。 革兰氏阴、阳性菌所用溶菌酶浓度与酶解时间表 溶菌酶终浓度 加入Lysozyme体积 室温下酶解时间 革兰氏阴性菌 400μg/ml 1μl或不加 3～5分钟 革兰氏阳性菌 3mg/ml ~8μl /150μl悬液 5～10分钟 五．操作步骤 1. 在按准备方法