抗流感病毒中和性单克隆抗体的制备及初步鉴定.pdfVIP

抗流感病毒中和性单克隆抗体的制备及初步鉴定 4试验结论………………………………………………………………………42 讨论与总结…………………………………………………………………………．．45 参考文献……………………………………………………………………………．．47 致谢…………………………………………………………………………………………………………一49 万方数据 摘要 抗流感病毒中和性单克隆抗体的制备及初步鉴定 摘要 每年春冬两季都可能会有季节性流感的发生，在世界范围内，季节性流感对 人类的生命安全造成了严重的影响。而-3新的流感病毒流行株出现，且人类对该 流行株不具有有效抵抗力时，便会造成流感大流行。近年来，出现了许多禽流感 感染人，并导致死亡的病例。这些均严重威胁着人类的生命安全。而现在普通疫 苗接种和抗流感药物已不再是流感防治的唯一手段了，流感病病毒广谱中和抗体 的研究为预防和治疗流感提供了新的方法。近几年，流感病毒广谱中和抗体的研 究取得了一定的成就和进展。而这些成就与进展也推动了其他相关领域的发展， 如广谱疫苗的发展，新的普遍保守位点的发现以及基础研究等。本次试验主要通 过杂交瘤细胞技术制备了lO株流感单克隆抗体，并通过微量中和试验以及血凝 抑制试验对这10株单克隆抗体进行初步鉴定。 1流感单克隆抗体的制备 用甲型H1N1、H3N2、H9N2和乙型流感病毒分别对小鼠进行免疫，每种病毒 免疫3只小鼠。免疫三次后，用血凝抑制法分别检测血清抗体对甲型H1N1、 H3N2、H9N2和乙型流感病毒的血凝抑制效价。血清抗体的血凝抑制效价大于 40时，即可进行细胞融合。融合前三天对小鼠进行加强免疫，激活记忆细胞， 使之成为能分泌抗体的B细胞。细胞融合后，培养4—5天，利用血凝抑制法初步 筛选出阳性孔进行克隆。收集由单个克隆扩增出的杂交瘤细胞所产生的抗体上 清，通过血凝抑制试验对该抗体上清进行粗筛。试验初步筛选出了20C5、20H7、 血凝抑制活性的单克隆抗体。 2流感单克隆抗体的初步鉴定 通过微量中和试验和血凝抑制试验对这10株单克隆抗体进行初步鉴定。利 用微量中和试验初步检测这10株单克隆抗体对甲型流感病毒的H1N1和H3N2 亚型以及乙型流感病毒的Yamagata系的中和活性。初步筛选出了4株可能对这 3种流感病毒同时具有中和活性的单克隆抗体。用这4株单克隆抗体进行微量中 检测这3株单克隆抗体对除H7N9亚型以外的6种流感病毒的血凝抑制活性。 关键字：甲型流感病毒；乙型流感病毒；血凝素；神经氨酸酶；单克隆抗体； 中和活性；血凝抑制活性 万方数据 PREPARATIONANDPRELIMINARY IDENTIFICATIONOFNEUTRALIIZING MONOCLONALANTIBODYAGINST VIRUS ABSTRACT Seasonalinfluenzaoftenoccurin andwinter．It seriOUSinfluence Spring brings onhumaninalloverthe twostrainsofavianinfluenzavirus body world．Currently havemutatedthatcouldinfecthuman，andlcadthemto vaccinationandantiviralwouldnotbethe two to influenza． drugs only waysprevent That’S influenza anewtrea