哺乳动物细胞重组抗体表达概述.pdf

活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 哺乳动物细胞重组抗体表达概述 单抗和多抗定义 蛋白结构表面可以使免疫系统产生抗体的区域叫抗原决定簇（又称抗原表位见右图 ）。 它一般由6-12个氨基酸或碳水基团组成 ，可以是由连续序列组成或不连续的蛋白质 三级结构组成。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇 ，因此 ，机体可以产生多种不 同的抗体。由单一 B淋巴细胞产生仅识别一特定抗原表位的抗体 ，称为单克隆抗体。 由多种 B细胞产生 ，受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗体称为多 克隆抗体。单抗与多抗的区别可参考单抗与多抗的区别。重组抗体生产根据基因序列制备得到单抗 ，通过构建稳定 表达细胞系满足对抗体量的生产。 重组抗体和免疫抗体制备 抗体的生产有两种方式。①利用重组蛋白的方式获取接近天然条件下的重组蛋白 （或多肽 ），通过刺激动物免疫系 统 ，最终获得抗体。②利用哺乳动物细胞生产 ，在已知抗体基因序列的前提下 ，将基因序列克隆到相应载体上 ，进 行重组抗体的表达。刺激动物免疫系统可以生产单抗或多抗 ，这种方法成功率高且抗体效价较好。而通过序列进行 重组抗体表达 ，针对特定基因只能生产单抗。两种生产方式在作用原理和流程等方面都有一定的区别和联系 ，具体 如下 ： 一、生产流程 Tel: 025 5889-4959 www.DetaiB Order@DetaiB （ ） 活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 哺乳动物细胞重组抗体生产 刺激动物免疫系统制备单抗 两种方式制备单抗综述 1. 抗原的制备 ：通过刺激动物免疫系统生产单抗前提是要获得抗原 ，抗原可以是可溶性蛋白 ，多肽。可溶性 蛋白通过重组蛋白生产得到。多肽作为抗原与载体偶联免疫小鼠 ，用多肽进行筛选 ，如不能进行抗体筛选 ， 需偶联另一种载体进行筛选 ； 2. 免疫动物 ：免疫动物一般选用 6周龄的小鼠 ，根据自己制定的实验方案操作。用已经制备的抗原免疫小鼠 ， 使其分泌 B淋巴细胞 ，进行下一步的融合 ； 3. 细胞融合 ：实验前准备好骨髓瘤细胞 ，骨髓瘤细胞与 B淋巴细胞按照一定的比例融合 ，形成杂交瘤细胞 ； 4. 杂交瘤细胞选择培养筛选 ：用 HAT 筛选①培养基筛选融合成功的杂交瘤细胞 ； 5. 融合细胞的单克隆生长鉴定 ：采用有限稀释法或其他方法进行杂交瘤细胞的克隆培养 ，通过鉴定最终得到 能够生产单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。 哺乳动物重组抗体在以上流程的基础上进行 1. 构建稳定表达细胞系 ：对上述实验得到的抗体测序得到抗体的序列 ，利用哺乳动物细胞生产重组抗体的方 式表达 ，筛选可稳定表达的细胞系。 2. 单克隆抗体的大量制备 ：筛选出能够稳定生产的细胞系 ，满足后续对抗体的大量需求 ，节约后续实验时间。 二、制备单抗的原理 哺乳动物细胞重组抗体表达 Tel: 025 5889-4959 www.DetaiB Order@DetaiB （ ） 活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 传统的生产抗体的方式是用抗原刺激动物免疫系统 ，这种方式需先制备抗原 ，且利用这种方法生产抗体难以满足大 量的生产 （需求大量的实验耗材和时间 ）。而哺乳动物细胞生产抗体的方式有一定的优势。①已知抗体的基因序列 ， 将序列克隆到表达载体上 ，导入到哺乳动物细胞体内培养 ，通过一系列的筛选简单最终获得能够稳定生产此抗体基 因的稳定细胞系