十字花科黑腐病菌中一个假定双组份系统的表达和磷酸传递研究.docVIP

PAGE IV 十字花科黑腐病菌中一个假定双组份系统的 表达与磷酸传递研究 摘 要 双组份系统是微生物重要的信号转导途径，在感知环境刺激后，通过磷酸传递的方式将信号传递至胞内，从而产生应答调控功能；十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv. campestris，Xcc)8004，是研究微生物与植物相互作用的重要模式菌，全基因组测序已经完成，其中注释为双组分系统的基因有106个。XC3669，XC3670分别注释为应答调节蛋白和组氨酸激酶，是一个假定双组份系统。XC3670位于XC3669下游，两个ORF间隔4bp。同源性分析表明，XC3670-XC3669很保守，在许多已测序的微生物基因组中都存在其同源基因对，DNA序列分析表明原始XC3670的G2 box被一段插入序列所隔开，该插入序列编码两个IS1404转座酶，为重叠基因。本实验中，分别构建了XC3670/XC3670C、XC3669/XC3669N和HrpG的pET-30a(+)/ pQE-30 Xa表达载体，在E.coli BL21(DE3)/M15[pREP4]中表达，同时对HrpG的可溶性表达进行优化，通过调节诱导温度、IPIG浓度和诱导时间最终确定HrpG的最优表达条件为20℃、IPTG浓度0.8 mM、诱导时间4 h，此时HrpG在破胞上清液的可溶性表达状况最好。纯化重组蛋白进行i