植物离体无性繁殖和脱病毒技术.pptVIP

第四章 植物离体无性繁殖和脱病毒技术;要点概述;无病毒苗;病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。 潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。 国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病毒苗，实施农作物无病毒化栽培。 ;一.病毒在植物体内的分布、传播及危害;2.传播及危害: 病毒在植株个体间的传播分为介体和非介体传播两类 在无性繁殖的种类中，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，危害日趋严重。 病原菌的侵染不一定会造成植物的死亡, 却会大大降低植物的生长发育及产量和质量,从而影响其栽培的经济效益。 因此, 脱除病毒及其他病原菌对植物栽培生产是非常必要的。 ;二、植物脱毒的原理和方法;2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制； 3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增殖 。 ;（二）植物脱病毒方法;1.热处理脱毒法 热处理脱毒原理: 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传染能力。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。 ;热处理的方法： （1）温汤浸渍处理 （2）热空气处理脱毒法 试验母株在高温生长室中生长一段时间，其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培养。 生长室温度35-40℃ 光照3000—10000 lx;热处理的优缺点 优点: 方法简单，效果明显。 缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。;生物学方法 包括茎尖分生组织培养、微型嫁接、愈伤组织诱导、珠心组织培养。 ;1、茎尖分生组织培养 1）原理及依据 病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少 病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争 2）操作程序 外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。 ;茎尖培养;优缺点：;2、微型嫁接 应用微型嫁接的原因： 木本植物茎尖培养难以生根形成植株。 具体做法： 将极小的茎尖（0.14mm~1.0mm）作为接穗嫁接到不带病毒的种子实生苗砧木上，然后将砧木、接穗一起在培养基上培养。 优点：接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培养，去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。 微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关;脱除病毒的关键： ①要求剥离技术很高 ②需要考虑砧木和接穗对营养组成的不同要求； ③与接穗的取材季节有密切关系（苹果4~6月取材嫁接成活率较高。）;3、愈伤组织培养脱毒法 （1）原理及依据 a、病毒在植物体内分布不均匀 b、病毒复制的能力衰退或丢失 c、继代培养的愈伤组织产生抗性变异;（2）技术关键 诱导再生植株的愈伤组织 （3）操作程序 植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。 愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，常出现一些变异。;4、珠心组织 病毒是通过维管组织传播，而珠心组织和维管束系统无直接联系，故可以通过珠心组织离体培养获得无病毒植株。 目前已用该方法去除了柑橘银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、速衰病等病毒。 ;三、植物病毒的检测及无病毒苗的保存和繁殖; 植物病毒的检测方法 1、视觉观察法 (直接检测法) 看植株的茎叶是否有该病毒所有可见症状。;2、指示植物检测法 (指示植物indicating Plant) 由于采用汁液接种法比较困难，所以通常采用嫁接接种的方法, 利用嫁接法接种，把待测的植物接种在敏感植物上，然后视其有无病斑，来判断是否脱除了病毒。 ;指示植物indicating Plant法;3、抗血清鉴定法  利用抗原与抗体特异反应的特性，用已知病毒的抗血