微生物生长和环境条件.pptVIP

第五章 微生物的生长与环境条件 概念微生物的生长 第一节 微生物的生长 第二节 测定生长繁殖的方法 第三节 微生物的连续培养 第四节 影响微生物生长的主要因素 微生物的生长 生长是指生物个体的大小或体积的增加 繁殖是指个体数目的增加 单细胞微生物生长繁殖速度很快，生长和繁殖不易分开，因此实际上常以群体的生长作为单细胞微生物的生长指标。 研究生长繁殖，作为研究微生物各种生命活动的重要指标；在利用微生物进行工业发酵，污染环境的生物净化，以及在致病、霉腐微生物的杀灭、控制方面，都是非常重要的 第一节 微生物的生长 一、细菌的个体生长和同步生长 二、典型生长曲线 1.延滞期 2.指数期 3.稳定期 4.衰亡期 三、微生物的连续培养 一、细菌的个体生长和同步生长 个体生长 电镜法 同步生长 概念：使用各种方法，使细胞群体处于分裂步调一致的状态。 同步培养技术（醋酸纤维微孔滤膜法） p186 二、典型生长曲线* 任何生物都有出生、发育、繁殖、衰老和死亡的过程。微生物也不例外，不过，不是以个体为对象，以群体的生长作为单细胞微生物的生长指标。 概念把单细胞的微生物接种到体积一定的液体营养液中，在适宜的条件下培养，微生物会不断增殖，细胞数目不断增加，如果把这种增加情况画一个对数曲线，(纵坐标为每毫升培养液中细胞数目的对数，横坐标为培养时间)。 生长曲线代表细菌在一个新的适宜的环境中生长繁殖以至衰老死亡的全部过程的动态。 典型生长曲线 根据细菌生长繁殖速率的不同,可将生长曲线大致分为 延迟期 对数期 稳定期 衰亡期 1.延迟期 特征 细胞不分裂（不生长），但细胞变大，细胞内RNA含量增高，原生质呈碱性，合成代谢活跃，易合成新的诱导酶，对外界环境变化敏感。接种物中死细胞较多或培养基不丰富时延滞期较长 实践意义 2.对数期（又称指数期） 细胞分裂（生长）最快，细菌数以几何级数增加，酶系活跃，代谢旺盛。生长速率由营养成分和培养条件决定。 细菌的对数生长期，几个反映微生物生长情况的重要指标。分裂的次数：以n表示，即一个单细胞微生物一分为二的次数。生长速率常数：以R表示，指每小时细胞分裂的次数，代时：以G表示，指细胞每分裂一次所需要的时间。 代时的计算 细菌数以几何级数增加，即经n次分裂产生2n个细菌。假如在时间tl时菌数为x1，经过一段时间到t2时，菌数为x2，则代时(G)应为分裂增殖时间除以分裂增殖代数(n). G=t2-t1/n x2 = 2n x1 G=( t2-t1)/3.32(lgx2-lgx1) 一些微生物的代时 细菌种类 培养基 培养温度 代时 (℃) （分） E. Coli 肉汤 37 17 E. Coli 牛奶 37 12.5 产气肠杆菌 肉汤,牛奶 37 16—18 产气肠杆菌 合成培养基 37 29—44 嗜热芽孢杆菌 肉汤 55 18.3 B. Subtilis 肉汤 25 26—32 嗜酸乳杆菌 牛奶 37 66—87 乳酸链球菌 牛奶 37 26 乳酸链球菌 乳糖肉汤 37 48 影响代时的因素 菌种 营养成分(营养物种类以及浓度) 培养温度 初始pH 3.稳定期 新繁殖的细胞与死亡细胞数目几乎相等，处于动态平衡。菌体产量达到最高，细胞开始储藏糖原、脂肪等储藏物，产芽孢的开始形成芽孢，开始合成次生代谢产物。可能由于营养物的消耗或抑制生长的代谢产物积累，细胞停止增殖，但仍存活 实践意义 4.衰亡期 死亡细胞数目超过新生细胞，群体中活菌数目急剧下降，出现了“负生长”；细胞形态多样，有时产生畸形，细胞开始自溶，开始释放次生代谢产物。 三、微生物的连续培养 连续培养相对于单批培养而言，人为方式将微生物生长保持在一定状态，一般在指数期或稳定期 连续培养器 恒浊器以光电控制系统控制微生物在培养器中的密度 恒化器控制某一培养物浓度的方法 第二节 测定生长繁殖的方法 概述 一、测生长量 1.直接法 2.间接法 二、计繁殖数 一、测生长量 1.直接法(对比复习) 测体积(沉降法) 称干重(离心法；滤膜烘干法) 2.间接法 比浊法(McFarland;分光光度计法) 生理指标法(测含氮量、含碳量、气体产生量等) 分光光度计法 生理指标法 二、计繁殖数 1.直接法(使用显微镜计总菌数) 比例计数法 血球计数板法 2.间接法 液体稀释法(MPN法) 平板菌落计数法 富集法 血球计数板法 计数室 大格(0.1mm3 ) 包括25中格、亦等同于包括400个小格 计算法 小格菌数均值/小格体积 个/ml 液体稀释法 平板菌落计数法 富集法 第三节 微生物的培养 一、微生物实验室培养法 固体培养 液体培养 二、 生产实践中的微生物培养装置 固体培养