分子生物学酵母杂交等.ppt

2、免疫共沉淀技术 将靶蛋白的抗体连接到固体基质上，再将可能与靶蛋白发生相互作用的待筛选蛋白加入反应体系中，用低离心力沉淀或微膜过滤法在固体基质和抗体的共同作用下将蛋白复合物沉淀到试管的底部或微膜上。 非特异结合的蛋白质 图6-26 缺少注解 3、GST融合蛋白沉降技术 利用GST对谷胱甘肽偶联的琼脂糖球珠的亲和， 离心，沉降，分离，从混合蛋白质样品中纯化得到相互作用蛋白。 发生相互作用 不发生相互作用 P224 谷胱甘肽转硫酶(Glutathione S-transferase) 离心，沉降 Pull-Down Pull-down 试剂盒 4. 细胞内蛋白质相互作用研究—荧光共振能量转移法（FRET） FRET荧光能量转移有三个基本条件： （1）给体与受体在合适的距离（1～10 nm）； （2）给体的发射光谱与受体的吸收光谱有一定的重叠（这是能量匹配的条件）； （3）给体与受体的偶极具有一定的空间取向（这是偶极-偶极耦合作用的条件）。 FRET需要有两个探针，即荧光给体和荧光受体，要求给体的发射光谱与受体的吸收光 谱有一定的重叠，而与受体的发射光谱尽量 没有重叠。不同蛋白的吸收和发射波长不 同，可根据需要组成不同的探针对。常用的 探针有： 荧光蛋白，一类能发射荧光的天然蛋白及其 突变体。 传统有机染料，具有特征吸收和发射光谱的 有机化合物组成的染料对