绿色荧光蛋白小鼠骨髓间充质干细胞培养及其示踪-解放军医学院学报.pdf

506 军医进修学院学报 J Chinese PLA Postgrad Med Sch May 2012，33（5） 绿色荧光蛋白小鼠骨髓间充质干细胞培养及其示踪的可行性 陈倩倩，万　军，阎　丽，王卫华，王昌正，石　卉，苏斌斌，曾庆环，杜海涛 解放军总医院 南楼消化科，北京　100853 摘要 ：目的 观察并比较两种小鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法及选取 GFP-BMSCs 作为移植实验示踪的种子细胞可行 性。方法 通过骨片培养法 (A 法 ) 和全骨髓贴壁法 (B 法 ) 培养扩增小鼠骨髓间充质干细胞，并参照不同的培养方法优化其 换液方式 ；观察两种培养方法原代及传代 GFP 小鼠骨髓 MSCs 形态变化 ；取第 3 代细胞进行生长曲线测定及多向分化功能 检测 ；观察 GFP 小鼠骨髓 MSC 经多次传代及诱导分化后绿色荧光的稳定性。结果 1)A 法原代培养可见贴壁细胞增殖形成 大小不等的克隆集落，并向周围进一步扩展、融合，而 B 法在原代培养时由于混杂较多血液系统细胞，传代至 3、4 代即 可获得较纯的 BMSCs ；2) 观察其生长曲线，A 法细胞扩增速度快，纯度高，B 法细胞由于受杂细胞的影响，扩增难度大 ； 3)BMSCs 可被诱导成脂肪细胞，油红 O 染色可见红色脂肪颗粒 ；在成骨分化过程中可见骨结节结构形成 ；4)GFP-BMSCs 传 代后生物学特性稳定，传代至 5 代及诱导分化后其 GFP 表达仍为强阳性。结论 与传统全骨髓贴壁法相比，骨片培养法可 在原代或 1 代就获得高浓度的足量干细胞，GFP-BMSCs 经多次传代后荧光不减退，可作为体内细胞示踪。 关键词 ：骨髓间充质干细胞 ；干细胞培养 ；方法比较 ；绿色荧光蛋白 ；示踪 中图分类号 ：R 331.23　　文献标识码 ：A　　文章编号 ：1005-1139(2012)05-0506-04 Culture and labeling of bone marrow mesenchymal stem cells from green fluorescence protein mice: A comparative study CHEN Qian-qian, WAN Jun, YAN Li, WANG Wei-hua, WANG Chang-zheng, SHI Hui, SU Bin-bin, ZENG Qing-huan, DU Hai-tao Department of Geriatric Gastroenterology, Chinese PLA General Hospital, Beij ing 100853, China Corresponding author: WAN Jun. Email: wanjun30 1@126.com Abstract: Objective To obverse and compare the two isolation and culture methods for bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and study the feasibility to use green fluorescence protein(GFP)-BMSCs as a labeling method in transplantation experiment. Methods Proliferation of BMSCs cultured with compact bone culture method(A) and whole bone marrow culture method(B) was induced and other culture methods were used to optimize fluid-changing measures. Morphological changes in GFP- BMSCs cultured with methods A and B were observed. Activity of BMSCs in GFP mice was identified according to the growth curve and multi-differentiation functions of BMSCs after the third passage. The stability of BMSCs in GFP mice after several passages and gr