第九章-特殊染色.ppt

第九章 特 殊 染 色 ?一、特殊染色的概念及意义 特殊染色为常规染色（即苏木素、伊红）的必要补充，又称选择性染色，只有相对的特异性，如PAS阴性反应它有糖元。 意义：（1）特染能显示在常规染色切片中不明显的部分，如革兰氏染色、细菌染色。（2）区别HE染色中不能鉴别的组织病变，如VG染色区别胶元纤维和平滑肌。（3）显示某些常规染色中不能着色的物质，如网染才能显示网状纤维，常规HE染色是染不出来的。因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的组成部分，它在病理诊断常着辅助作用，也为科研提供依据。 二、学习特染技术应掌握的重点 （注意事项）（1）染色方法的成败，应该在温度、浓度、时间和PH值等方面找原因。（2）注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能达到目的，一般先在HE切片所见的要求去选择适当的特染方法，一种或多种。 （3）必须掌握各种特殊染色的结果，避免导致错误的结论或严重的误诊，如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。（4）尽量要阳性切片作对照，便于选择特染方法，并与HE切片作对照。（5）特染的组织，在其固定、脱水根据要求选择。所用的器皿都必须化学清洗。 三、玻璃器皿的清洁 在病理实验室可用的玻璃器皿，都必须经过清洗干净才能使用，清洗的方法依玻璃器皿的新旧而不同。 1、新购玻璃器皿的处理 对于新购买的玻璃器皿应先用洗衣粉浸泡洗刷，自来水冲洗后再用1—2%盐酸水溶液浸泡数小时后，用自来水冲洗干净，必要时可用少量蒸馏水洗2次 2、使用后玻璃器皿的处理 每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底清洗干净，以供下次实验之用，如轻视这一步骤，可用的玻璃器皿不够干净，则会影响染色效果，甚至导致染色失败，特别在酶组化和银离子反应操作过程中更有严格的要求，使用后的玻璃器皿在一般清洗后，还要求用硫酸清洗液浸泡。 硫酸清洗液配制重铬酸钾 80g自来水 1000ml浓硫酸（工业用） 120m新配制的清洁液为红褐色，反复使用一段时间后，慢慢变成绿色，说明清洁液已失败，不能继续使用应重新配制。 3、玻璃器皿的清洗方法 ① 任何玻璃器皿都必须用自来水冲洗，然后把残余药液或染液洗去。② 用毛刷沾洗衣粉擦干净。③ 自来水冲洗，蒸馏水洗2次。④ 把晾干的器皿轻轻置入清洁液浸泡数日。⑤ 取出器皿，用自来水把器皿内外彻底冲洗干净，最后用蒸馏水洗2次。⑥ 把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或温箱中烤干，最后存放橱内备用。 ?常用的特染第一节 结缔组织染色 一、胶元纤维染色（VG 染色）㈠ 胶元纤维的分部组成成分  胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁 、子宫和基底膜等。胶原纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。 ?苦味酸—酸性品红法1． VG 染液试剂配制1%酸性品红 10ml苦味酸饱和液 90ml此液常分别配制临用时加以混合，不能久用。 【染色步骤】（1）组织固定于10%早醛液中，常规脱水包埋（2）组织切片脱腊至水。（3）V-G染液2-5’（酸性品红1：苦味酸饱和液9）（4）倾去染液，无水酒精急速脱水，用滤纸吸干（5）二甲苯透明，中性树胶封片。 【结果】? 胶元纤维呈红色，肌纤维、胞质及 红细胞黄色。 ㈡ 胶元纤维染色应用 胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源； 常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。 观察动脉硬化的心脏，在HＥ切片中，心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶原纤维染色可将胶原组织和肌肉上明显地区分开来。 早期肝硬化用胶原纤维染色，也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。 二、 网状纤维染色㈠网状纤维染色的形态特点和染色原理 网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。它由网状细胞产生，网状纤维细而有分支，穿行于细胞体和突之间，共同构成网状支架。这种纤维用HE染色一般不易辨认。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，故又称嗜银纤维。 （二）网状纤维染色的原理  网状纤维的染色方法很多，但是染色原理基本相同，有以下方面。（1）氧化 使网状纤维具有选择性，不经氧化的切片，常用的氧化剂是高锰酸钾。（2）漂白 一般采用2%草酸，漂白后无色 （3）媒染 多用2%硫酸铁氨（俗称铁明矾）。这些试剂可