新微生物限度检查方法验证实施方案.docVIP

微生物限度检查方法验证方案 六、验证内容? 1.供试液的制备? 1.1.取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:10的供试液。? 1.2.取1:10供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:100的供试液。? 1.3.取1:100供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:1000的供试液。? ???备注：供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。? ????2.菌液制备? 2.1.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养?物至胰酪大豆胨液体培养基中，30?35℃培养18～24小时；分别取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至、、、制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。? 2.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20?25℃培养2～3?天；取此培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至，制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。? ?2.3.将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20?25℃培养5?7天，使大量的孢子成熟。