细胞分化2幻灯片.ppt

* * 细胞分化(干细胞) 干细胞的生物学特征 干细胞具有未分化或低分化特性，多向分化潜能。 干细胞具有“无限”的自我更新能力。 ?可连续分裂几代，也可在较长时间内处于静止状态。 干细胞的形态及生化特征 形态：体积小、核大、细胞器不发达…… 生化：干细胞的共同标志，如端粒酶活性 不同干细胞的特有标志，如人造血干细胞表现为CD34和 CD133 ；上皮干细胞有高表达的β1整合素，可介导干细胞与细胞外基质粘附从而抑制其分化的发生；神经干细胞 Nestin、CD133和CD24等 本质特征：具有增殖和自我更新能力以及在适当条件下表现出一定的分化潜能。 独特的增殖特性 分裂的周期性慢，绝大多数干细胞处于G0期。进入分化程序时先经过一个短暂的增殖期，形成过渡放大细胞（transit amplifying cell） 缓慢增殖有利于对外界信号做出反应，减少发生基因突变的危险，而快速分裂的过渡放大细胞使干细胞仅进行较少次数的分裂即可产生较多数量的分化细胞。 增殖有自稳定性 通过自我更新和维持自身数量实现自稳定性（self-maintenance）。 在自我更新中，分裂的形式分为对称分裂和不对称分裂。 对称分裂symmetry division：干细胞分裂产生同类型细胞，如两个子细胞都是干细胞或都是分化细胞 不对称分裂asymmetry division：干细胞分裂产生不同类型细胞，如两个子细胞中一个是干细胞另一个是分化细胞。 干细胞的分化特征 在适当条件下，可实现细胞的转分化和去分化。 转分化（transdifferentiation） ：一种组织类型的干细胞，在适当条件下分化成另一组织类型的细胞－－体现了干细胞的可塑性 去分化（dedifferentiation）：干细胞向其前体细胞的逆向转化。 1999年Goodell分离出小鼠的肌肉干细胞，体外培养5天后，与少量的骨髓间质细胞一起移植入接受亚致死量辐射的小鼠中，结果发现肌肉干细胞会分化为各种血细胞系。 转分化 去分化 干细胞微环境 一系列的干细胞与细胞外所有物质共同构成的细胞生长的微环境－－干细胞龛（stem cell niche）。 是干细胞维持自我更新和分化潜能的重要场所。 干细胞需要特殊的微环境才能执行正常的生理功能 如果将干细胞从其正常生存的微环境中分离，它们即丧失了自我更新的能力。 微环境还能调控干细胞的分化发育方向，在不同信号途径构成的微环境中，干细胞能向不同的谱系细胞分化（可塑性）。 胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESC) 在人胚胎发育的囊胚期，囊胚中心的腔称囊胚腔，腔内有内细胞群（inner cell mass, ICM）。 内细胞群形成内、中、外三个胚层，每个胚层将分别分化形成不同的各组织和器官。 当内细胞群在培养皿中培养时，我们称之为胚胎干细胞。 ESC特点 可在体外无限培养增殖 长期保持原始未分化状态 可分化出衍生于3胚层的各类组织细胞 胚胎干细胞可以诱导分化为任何一种组织细胞 胚胎干细胞的获得 Thomson的工作:从人类胚胎的囊胚期内细胞群中直接分离多能干细胞。 Gearhart的工作：Gearheart从从终止妊娠的胎儿原本要发育成睾丸或卵巢的部位取得细胞。 分离桑葚胚细胞 体细胞核转移 胚胎干细胞的主要特征 形态：体积小、核大、紧密堆积，无明显细胞界限 生化：特异性的基因产物－－胚胎阶段特异性抗原（stage-specific embryonic antigen，SSEA）、 TRA 、整联蛋白/层粘连蛋白、 转录因子（Oct3/4，Sox2），端粒酶活性高 分化能力强，可在体外长期培养 将ESC注射到裸鼠皮下，小鼠可产生畸胎瘤。分化的胚胎组织包括胃上皮组织(内胚层),骨和软骨组织、平滑肌和横纹肌(中胚层)，神经表皮、神经节和复层鳞状上皮(外胚层)等。 动物模型：嵌合体小鼠 增殖与分化分子机制 ESC的分离培养首先需要解决的问题是阻止引起分化的基因的激活与表达，以实现分化抑制，保证细胞的全能性。ESC在体外需在饲养层(feeder layer)细胞上培养才能维持其未分化状态，一旦脱离饲养层就自发地进行分化。 选择合适培养基，添加LIF（小鼠ES细胞 ） LIF-STAT信号通路图 白血病抑制因子（LIF）是保持小鼠干细胞特性的重要细胞因子，通过JAK-STAT或 SHP-2-Gab1-ERK维持其增殖状态。 加入不同种类的生长因子，导入外源性基因或者移植到动物体内的某一部位使细胞进入定向分化。 干细胞的应用前景 研究胚胎发育、疾病以及药物作用的良好模型 最终目的是应用干细胞治疗疾病。 理论上讲，干细胞可以用于各种疾病的治疗。 不需要完全了解疾病发病