工业微生物实验技术第二章 微生物的纯种分离与培养技术.pptVIP

实验2-2 化能自养微生物的分离与纯化 　　五、实验报告 　　1. 记录硝化细菌的分离方法及培养条件于下表2-6。 　　2 .分离、纯化硝化细菌菌株的记录于表2-7。 表2-6硝化细菌分离方法及培养条件 样品来源 分离方法 稀释度 培养基名称 培养温度 培养条件 实验2-2 化能自养微生物的分离与纯化 表2-7分离、纯化硝化细菌菌株的记录 菌株编号 分离培养基 菌落特征 镜检结果 返回 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 　　　一、实验目的 　　　1.了解厌氧微生物的生长特性； 　　　2.观察厌氧微生物（产甲烷菌）的形态特征； 　　　3.掌握亨氏厌氧技术分离产甲烷细菌的方法。 　　　二、实验原理 　本实验所使用的亨盖特滚管技术，就是把适当稀释度的产甲烷细菌富集培养物，在无氧条件下接入含灭菌琼脂培养基的厌氧试管中，然后将它在滚管机上或者冰盘中均匀滚动，使含菌培养基均匀地凝固在试管内壁上。 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 　　三、实验材料 　　1. 菌源样品 沼液。 　　2. 培养基 产甲烷菌分离培养基（固体和液体）若干试管，培养基的配方见附录Ⅴ。 　　3. 灭菌的厌氧试剂 硫化钠(1%)+碳酸氢钠(5%)混合试剂，20.5％乙酸钠，25%甲酸钠，50%甲醇。 　　4. 器材 高纯度的氮气，氢气和二氧化碳，氧装置一套，水浴锅，无菌毛细管，试管架，滚管机，冰块，lmL灭菌注射器若干，旋涡混合器l台。 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 　　四、实验方法 　　1. 富集培养 在已灭菌的液体培养管中用lmL灭菌注射器加入1%硫化钠和碳酸氢钠混合试剂0.1mL，加入青霉素液0.1mL，加入乙酸钠、甲酸钠、甲醇各0.lmL，然后接入分离物lg。置35℃下振荡培养10～15d。 　　2. 熔化好装有固体培养基的培养管，排列在水温为50～60℃的水浴锅中的试管架上，每一分离对象排列6支，每列前放一支同样组分、仅缺少琼脂的液体培养基。 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 　　3. 在每支琼脂培养管中，用lmL注射器分别加入硫化钠(1%)和碳酸氢钠(5%)混合试剂0.1mL、青霉素液0.1mL、乙酸钠0.lmL、甲酸钠0.1mL、甲醇0.1mL。 　　4. 把加富培养物在旋涡混合器上将絮状物打散。 　　5. 用lmL灭菌注射器以氮气流洗去氧后，吸取0.1mL样品，迅速注入第一支液体培养基中，此管立即在旋涡混合器上混匀，然后换1支注射器取0.5mL注入第二支琼脂培养管中，依此稀释。每次稀释后均应混匀。一般稀释至10-6。稀释时，每做一个稀释度都要更换1支注射器。 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 　　6. 在滚管机水槽中加入冰块，并加入冷水。水位加至滚轴下线浸没冰块约2～3mm，使在滚轴转动时冰水在滚轴上形成一层均匀水膜。冰块加入量使滚管过程中水温保持在较低温度，能使培养管中琼脂培养基迅速凝固。 　　7. 启动滚管机，调节滚轴转速(60～80r/min)，将上述稀释的琼脂培养管平稳放在滚轴与支托点之间，任意均匀转动。待琼脂培养基在培养管内壁凝固成均匀透明的琼脂薄膜为止。若无滚管机，可在一瓷盘中加水和冰块(为降低温度还可加少量食盐)，用手滚管。 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 　　8. 如以二氧化碳为基质，滚管后用氢气置换氮气。再注入二氧化碳。30mL的厌氧培养管中注入6mL二氧化碳，或直接以氢和二氧化碳混合气体(5∶l体积比)进行换气。 　　9. 滚管后放置于35～37℃培养，约l0～15d后可见细小菌落出现。但以乙酸盐为基质的产甲烷菌菌落出现所需时间较长。 　　10. 按亨氏厌氧操作法，用无菌毛细管挑取单菌落转液体培养基进行厌氧培养。在荧光显微镜下镜检单菌落培养物。产甲烷菌菌体有自发荧光，在荧光显微下菌体呈现黄绿色。如不纯，应做进一步的滚管分离，直至获得纯培养体。 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 　　五、实验报告 　　１ .记录产甲烷菌的分离方法及培养条件于下表2-8。 　　2 .荧光显微镜下镜检单菌落培养物的记录于表2-9。 表2-8 产甲烷菌分离方法及培养条件 样品来源 分离方法 培养基名称 培养温度 培养条件 实验2-3 厌氧菌的分离与培养 表2-9 荧光显微镜下镜检单菌落培养物的记录 菌落编号 自发荧光有无 菌落特征 镜检菌体颜色 微生物实验技术 第二章 微生物的纯种分离及培养技术 微生物的纯种分离及培养技术 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母 菌及霉菌的分离与纯化 实验2-2 化能自养微生物的分离与纯化 实验2-3 从沼液中分离产甲烷细菌 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化 　　一、实验