X3-1-2基因工程的基本操作程序.pptVIP

* 靶序列 靶序列 引物 Ⅰ 引物 Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ PCR 循环第二步：引物与靶序列退火 * 靶序列 靶序列 引物Ⅰ 引物Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ Taq DNA 聚合酶 PCR 循环第三步：引物延伸 * 靶序列 靶序列 第1个 PCR 循环完成后：得到两个拷贝的靶序列 * PCR是针对特定DNA片断的快速体外复制增殖技术 每循环一轮，目的基因的量可增加一倍 增殖速率为2n,（n为循环次数） 每完成一个循环需2-4分钟，2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 * PCR技术扩增过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成 。 b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物 与DNA模板结合，形成局部 。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的 。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 * 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 归纳：获取目的基因的方法 DNA合成仪 DNA序列自动测序仪 PCR扩增仪 * 基因表达载体的构建——核心 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的