第7章 细胞融合与体细胞杂交课件.ppt

第7章 细胞融合与体细胞杂交 酸酸甜甜 才是生活！细胞杂交技术可以改变生活！ 同样，有没有可能培育出 地下结土豆，地上结番茄 的超级植物？ 1978年德国科学家梅歇 尔斯将番茄与马铃薯进行 体细胞杂交育成薯番茄“ 泡马豆”（po(tato)- (to)mato）。马铃薯与番茄两种原生质体的融合率竟高达40％～50％。 植物细胞杂交视频观看： /special/show_3043714/ACRkYAQc9LIhIUwv.html 这种植株已经杂交成功了 ，不过遗憾的是地上的马铃薯的地上部分，地下是番茄的地下部分既不结番茄也不结马铃薯 本章主要内容： 1 细胞融合 2 体细胞杂交 1、细胞融合定义及意义 细胞融合（Cell fusion）是指使用人工方法使两 个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。 如果亲本细胞是体细胞，也叫“体细胞杂交（somatic cell hybridization）”。 由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间 细胞的融合，因此细胞融合技术在创造新细胞、 培育新品种方面意义重大。 §7-1 细胞融合 2、细胞融合的分类 2.1 从亲本来源： （1）同核体（Homokaryon）：基因型相同的细胞融合成的融 合细胞称为。 （2）异核体（Heterokaryon）：来自不同基因型的融合细胞。 2.2 从融合效果： （1）对称融合（Symmetric fusion）：两个完整的细胞间的融 合。 （2）不对称融合（Asymmetric fusion）：利用物理（如X、Y射线）或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再与另外一个完整细胞进行融合。后代变异较大，一般都是非整倍体。 细胞核的融合是关键 若是没发生细胞核的融合，仅发 生了细胞质的融合，则可能成为 嵌合细胞。 含有多个核的异核细胞合并后形 成的单核细胞称为合核细胞。 细胞核的合并发生在有丝分裂过 程中。但是这种有丝分裂只有当 两个核的DNA合成基本同步时才 能发生：两个核同时进行有丝分 裂，形成一个纺锤体，全部染色 体都排列在一个赤道板上，结果 伴随着细胞分裂就形成了单核的 子细胞，其细胞核中含有双亲细 胞的染色体。 3、细胞融合的主要步骤 （1）优良亲本选择（单细胞或原生质体制备） （2）两原生质体或细胞互相靠近，粘附 （3）质膜融合形成细胞桥（关键一步） （4）胞质渗透 （5）细胞核融合 （6）融合细胞筛选 细胞桥的形成 4 细胞融合方法 1.生物法 病毒诱导细胞融合：是研究最早的细胞融合诱导方法。主要是由于 病毒会与宿主细胞膜直接融合，同时进入两个细胞就会打破两个 细胞膜的隔阂，引发细胞质的交流，进而达到细胞融合的目的。 原因可能是病毒的磷脂外衣与动物细胞膜相似，病毒外壳上的某 些糖蛋白有促进细胞融合的功能。 仙台病毒、疱疹病毒、牛痘病毒和副黏液病毒等。仙台病毒（ HAJ）是两层磷脂组成的外膜包裹着RNA与蛋白质的复合体。因 HAJ病毒毒力弱，易被灭活而常采用。 缺点：要提前大量培养病毒，并且灭活后才能作为融合剂使用， 操作繁琐，而且一旦灭活不充分的话，病毒还可能感染操作者与 亲本细胞。因此，目前已经很少使用病毒诱导法进行细胞融合。 病毒介导融合原理与过程 （1）足够量的病毒颗粒附着在 细胞膜上起搭桥作用，使细胞 聚集在一起。 （2）通过病毒与原生质体或细 胞膜的作用使两个细胞膜间互 相渗透，胞质互相融合。粘结 部位质膜被破坏，不同细胞间 形成通道，细胞质流通并融合 （病毒也随之进入细胞质）。 （3）有丝分裂，细胞核融合， 形成杂种细胞。 （4）融合细胞筛选。 2 化学法 采用化学诱导剂促使细胞融合，包括： NaNO3、高pH的高浓度Ca2+ 离子、聚乙二醇（PEG） 、溶菌酶、明胶、抗体、 植物凝血素伴刀豆球蛋白 A等。 机理在于：细胞膜电荷平衡被打破。 （1） NaNO3诱导融合 1909年，凯斯特（Kuster）发现机械分离的发生 了质壁分离的洋葱表皮细胞原生质体在NaNO3溶 液中可以恢复并伴随着细胞融合。 1972年，卡尔森（Carlson）利用NaNO3诱导融 合了粉兰烟草和郎氏烟草原生质体，培育出世界 第一株体细胞杂种。 原理:NaNO3的钠离子可以中和原生质体表面负电荷， 引起原生质体聚集，促进细胞融合。NaNO3对原 生质体无损害，但融合效率低，一般小于4%。 （2）高pH的高浓度Ca2+离子诱导融合 1973年，凯勒（Keller）和梅尔切斯（Melchers） 发现采用强碱性（例如pH 10.5）的高浓度钙离子溶 液（50mmol/LCaCl2?2H2O）在37℃下处理两个品系 的烟草叶肉原生质体，很容易促使融合，融合率可 以达到10%。 原理：钙离子中和原生质体膜或细胞膜表明表面电荷， 使彼此紧密接触，决定质