洁净区环境测试操作规程完整.doc

. . word版本 洁净区环境测试操作规程 颁发部门：质量部 分发部门：生产部、设备部、质量部、采购部、仓储部、财务部 一、目的：建立一个空气洁净度监测标准操作规程，规范空气洁净度监测操作程序，保证细胞生产洁净车间的空气洁净度符合GMP 要求。 二、范围：适用细胞生产洁净车间的空气洁净度的监控。 三、职责/依据：质量部负责该标准操作规程的制订，并监督制度的执行；质量保证部和质量控制部门负责该标准操作规程的实施；质量保证部门对进行监督与检查。 四、程序/内容： 1 概述 1.1洁净厂房是指根据需要对空气的尘粒（包括微生物）、风速、温湿度及压力等进行控制的密闭环境，其建筑结构、装备及其使用均具有减少该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能，并以其空气洁净度等级符合《药品生产质量管理规范》的要求。 1.2 洁净厂房分为：D级、C级，B级、A级。本公司细胞生产洁净区为D级、C级和局部A级。 2 沉降菌测试 2.1 方法概述 本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48 小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 2.2 所用设备及仪器 高压灭菌锅：使用时严格按照操作规程使用 恒温培养箱：定期对培养箱温度进行检定 2.3 培养皿：一般采用ф90mm×15mm玻璃培养皿。 2.4 培养基：普通营养琼脂培养基 将培养基加热熔化，冷却至约45℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养皿放入30~35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养皿应在2~8℃的环境中存放。 2.5 测试步骤 1）采样 ①将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。 ② 静态测试时，培养皿暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿暴露时间为4小时，单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。 ③全部采样结束后，将培养皿盖上盖子，倒置放置。 2）培养 ①全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 ②在 30~35℃培养，时间不少于72h。 ③每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3 只培养皿作对照培养。 3）菌落计数 ①用肉眼直接计数。 ②若培养皿上有2 个或2 个以上菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2 个以上的菌落计数。 2.6 注意事项 1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、准确性。 2）采取一切措施防止人为对样本的污染。 3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4）由于细菌种类繁多、差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 5）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 2.7 测试规则 1）测试状态 ①沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，压差必须控制在规定值内。 ②沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 ③测试状态有静态和动态两种，状态的选择必须符合生产的要求，并在报告及记录中注明测试状态。 2）测试人员 ①测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 ②静态测试时，室内测试人员不得多于2 个人。 3）测试时间 ①静态测试时，洁净厂房的空气净化调节系统的风机启动30分钟后开始测试。 ②动态测试，在生产人员处于正常生产状态下进行的测试。 ③对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10 分钟后开始。 ④对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30 分钟开始。 4）沉降菌计数 ①采样点数目及布置：采样点布置参考图1，工作区测试点位置离地0.8~1.5m 左右（略高于工作面）。 ②最少采样点数目，沉降菌的最少采样点数可按表1确定。 ③可在关键设点或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。 图1 沉降菌采样点数目及布置图 表1最低限度采样点数 面积(m2) 洁净级别 A级 B级 C级 D级 10 2～3 2～3 2 2 10≤S＜20 4 4 2 2 20≤S＜40 8 8 2 2 40≤S＜100 16 16 4 2 100≤S＜200 40 40 10 3 200≤S＜400 80 80 20 6 400≤S＜1000 160 160 40 13 1000≤S＜2000 400 400 100 32 2