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* 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过细胞水平或细胞器水平上的操作,按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。 知识目标 1. 简述植物组织培养和植物体细胞杂交技术。 2. 列举植物细胞工程的实际应用。 3. 尝试进行植物组织培养。 所采用技术的理论基础: 植物细胞的全能性。 通常采用的技术手段: 植物组织培养和植物体细胞杂交。 1.定义: 具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞,都具有发育成完整生物体的潜能,也就是说,每个生物细胞都具有全能性的特点。 2.原理: 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成为完整个体所必需的全部基因,从理论上讲,生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。 3.差异性: (1) 受精卵的全能性最高。 (2) 受精卵分化后的细胞中,体细胞的全能性比生殖细胞的低。 一、植物细胞的全能性 受精卵 生殖细胞 体细胞 > > (2)有一定营养物质、激素和其他外界条件。 4.细胞表现出全能性的条件: (1)离体状态。 为什么体内细胞没有表现出全能性,而是分化成为不同的组织、器官? 基因在特定空间和时间条件下选择性表达的结果。在个体发育的不同时期,生物体不同部位的细胞表达的基因是不同的,合成的蛋白质也不一样,从而形成了不同的组织和器官。 二、植物组织培养 1.就是在无菌和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整植株。 2.植物组织培养的培养基: 定义:含有一定营养成分,供组织培养植物生长的基质。 无机营养成分:C,H,O大量元素及部分微量元素。 有机营养成分: ①含N物质:包括维生素和氨基酸; ②碳源:2﹪—5﹪的蔗糖; ③琼脂:起支持作用; ④生长激素:生长素,细胞分裂素和赤霉素。 PH值:5.0-6.0。 根、芽 植物体 植物激素:细胞分裂素、生长素 3.植物组织培养的过程 离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 外植体 脱分化 再分化 几个概念: 愈伤组织:离体的植物器官、组织或细胞,在培养一段时间以后,通过细胞分裂,形成一种高度液泡化、无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松无规则的组织。 植物细胞的脱分化:由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程,又称去分化。 植物细胞的再分化:脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程。 外植体:从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官(根尖、茎、芽、嫩叶、种子、花粉等) 。 1.在组织培养实验中,为什么要强调所用器械的灭菌和实验人员的无菌操作? 植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分,有利于培养物的生长,然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长,所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。培养基一旦被污染,迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养,而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质,导致培养物迅速死亡。 造成培养基污染的因素有很多,一般包括:外植体带菌、培养瓶和各种器械灭菌不彻底、操作人员操作不规范等。所以在组织培养实验中用到的植物材料和各种器械都要进行彻底地灭菌,实验人员操作一定要规范,避免带入杂菌。 3.根据实验过程,概括出植物组织培养技术的流程简图。 为什么要在避光条件下培养愈伤组织? 对于植物组织培养来说,光照条件非常重要,包括光照强度、时间和波长。但在愈伤组织的诱导阶段往往要暗培养,而在分化再生的过程中一定要有光照。愈伤组织诱导阶段的暗培养有利于细胞的脱分化产生愈伤组织,如果在光照条件下容易分化产生维管等组织,不利于产生大量的愈伤组织。 1.定义:用两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞,且把杂种细胞培育成新的植物体的方法。 2.优势:(与有性杂交方法比较)打破了不同种生物间的生殖隔离限制,大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。 三、植物体细胞杂交 3.意义:克服远缘杂交不亲和的障碍、培育新品种。 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 正在融合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 筛选 愈伤组织 杂种植株 去细胞壁 纤维素酶 果胶酶 物理方法 化学方法: 离心 振动 电刺激 聚乙二醇 (PEG) 细胞分裂 植物组织培养 植物细胞融合 酶解法 人工 诱导 方法 脱分化 再分化 4.植物体细胞杂交过程示意图 1.为什么“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所想像的那样,地上长番茄、地下结马铃薯? 1978年,梅尔彻斯(Melchers)等人首
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