细菌和链霉菌的分子克隆载体.pptVIP

第四节 细菌和链霉菌的分子克隆载体; 一、革兰氏阴性菌克隆载体 1. 移动载体（mobilizable vector） 1)?特点 i. 广谱宿主范围，即复制子和遗传标记具很宽适应范围 ii. DNA的转移常常需要经过中间宿主细胞和借助于辅助质粒，DNA进入中间宿主细胞可用直接转化 2)?结构 i. RK2质粒的结构 a. oriV DNA复制起点 b. DNA复制基因 c. DNA转移基因 d. oriT DNA转移基因 e. 药物抗性基因（Apr Kanr Tcr）;G+菌的质粒和载体; ⅱ. 移动载体与辅助质粒 pRK2019: 将RK2中的全部转移基因和Kanr基因插入到 E.coli的colE1质粒中构成辅助质粒 pRK290: 余下部分（Apr除外）构成移动载体（约20Kb） * 当选用E.coli为中间宿主时，必须先将pRK290经过直接转化引入E.coli（pRK2019也应转入同一细胞）。当要转移pRK2