混合斑检验10用.pptVIP

;教 学 要 求; 笫一节 混合斑的特点和检验目的 ;;三、可能有混合斑的检材;;四、检验的步骤;五、注意事项;案例;第二节 精液与阴道液混合斑检验;一、混合斑的确证;1.细胞学检查;嗜碘试验;2.阴道肽酶测定;阴道肽酶测定： ;;;混合斑鉴定三类方法比较;（一）对比推断法;2. ABO 血 型 测 定; 混合斑中精液ABO血型的判定 (表一);混合斑中精液ABO血型的判定 (表二）;;（二）分离精液和阴道液组分进行检测;差异提取法 精子细胞核膜蛋白质富含二硫交联结构，对去污剂及外源性蛋白酶有相当强抵抗作用。 在混合斑检材中加适量TNE缓冲液、SDS和蛋白酶K，37℃水浴，3h。 去除基质后，离心，上清液含消化的阴道上皮细胞DNA，沉淀物即为精子。 ; 沉淀物以TNE缓冲液洗涤数次，加适量TNE缓冲液、SDS、蛋白酶K和DTT(二硫苏糖醇)， 56℃孵育过夜 在DTT的作用下二硫键断裂，精子细胞膜破裂，即可获取精子的DNA 笫一步消化的上清液提取阴道上皮细胞DNA 第二步消化的上清液提取精子的DNA;实际操作中并非每次都能保证理想地分离精子和阴道上皮细胞。如果现场混合斑中阴道上皮细胞数量远大于精子时，常会造成消化不完全，分离到的精子细胞DNA仍然是混合物；有时过度消化又可能消化掉一部分精子，导致精子