第四次实验质粒转化.pptVIP

基因工程技术 (Genetic engineering); 将重组DNA导入受体细胞的过程中叫做转化或转染。 细菌细胞能摄取外来DNA的生理状态称为感受态。;2.感受态形成假说： 局部原生质体假说：局部的细胞壁被破坏。 酶-受体假说：细胞壁是完整的，但在壁上产生了一些酶的位点，可以把外来DNA转入胞内。;3. 外来DNA进入细菌内部的过程;能自主复制； 具有两个以上的遗传标记基因，便于重组体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。;4. 受体菌的改造与选择：; 电击法:将细菌置入一定的容器内，通入高脉冲电压，使细菌处于感受态，此法成功效率高，可达1010/1ugDNA，但细胞容易死亡，约一半以上的细胞死亡。 化学法：如：Ca2+、DMSO、还原剂、氯化六氨合高钴等，成功率可达105-8/ug DNA。; 常用CaCl2制备感受???细菌 细菌在低渗的CaCl2溶液中逐渐膨胀成球形，DNA与Ca2+形成羟基-钙-磷酸复合物，被吸附在细菌表面，细菌经短暂热休克刺激被细菌摄取。;6. 制备感受态菌时期选择：;（见讲义） 注意事项： 1.冰浴操作，增加感受态量及延长感受态 时间。 2.无菌操作，防止杂菌污染。 3.试剂要求纯度高