2013五年制分子生物学20130922(1).pptVIP

（六）DNA芯片技术 分子生物学在医学实践中的应用日益广泛，当代医学生需要掌握的新知识体系。 分子生物学在医学实践中的应用日益广泛，当代医学生需要掌握的新知识体系。 1953年，Watson与Crick SDS - Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis 1、探针类型 DNA 探针：外显子区 cDNA 探针：特异性高 RNA 探针：特异性高，本底低 寡核苷酸探针：人工合成，检测突变 2、探针标记 同位素标记： 32P， 35S，3H 非同位素标记：生物素、地高辛、荧光素 （二）探针技术 2、探针标记 （1）DNA酶I：随机切割DNA单链 （2）DNA聚合酶I： 1）5’ 3 ’外切酶 2）5’ 3’聚合酶 2、探针标记 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ DNA Pol I 3XdNTPs+labled-dATP DNase I 3’ 3’ 5’ 5’ 5’ 3’ 缺口平移法标记探针： DNaseI 在dsDNA上切割3-5磷酸二酯键。 DNA PolI 延着5‘-3’方向切旧链，然后再合成新链。 ds-DNA template Mg 2+ Detect Hybrids denature Hybridize 2. 加入变性的探针DNA 1. 变性 3. 杂交 4. 检测杂交体 （二）探