自来水中细菌总数的测定.docVIP

PAGE PAGE 1 自来水中细菌总数的测定 （太原师范学院生物系 生物科学 082班 山西 太原） 摘 要：各种天然水中常常含一定数量的微生物。天然水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等［1］。自来水是指通过自来水处理厂净化、消毒后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活、生产使用的水。它主要通过水厂的取水泵站汲取江河湖泊及地下水，地表水。并经过沉淀、消毒、过滤等工艺流程，最后通过配水泵站输送到各个用户，但是自来水中仍然含有微量的微生物。我国饮用水标准规定，饮用水中细菌总数（1mL水样中所含的细菌菌落的总数）每毫升不超过100个。本实验应用平板菌落技术测定水中细菌总数。目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利用培养基制作平板。按菌落计数方法进行计数，通过实验测得的菌数对照国家饮用水标准来判断水质［2］。自来水的微生物学检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。 关键字：自来水 平板菌落计数技术 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 细菌总数 0 引言 水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。良好的饮用水细菌总数应100CFU/mL,而500CFU/mL则不宜饮用，我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定每毫升水样细菌总数37℃培养24h不得大于100个。细菌总数是指 水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。［3］ 水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。通过此方法我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。国际上一般都采用总大肠菌群作为指示菌，每升水中的总大肠菌群指数。我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定每升水中总大肠菌群37℃培养48h小于3个。每升饮用水的水源中，总大肠菌群不得超过1000个。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。除采用平板计数技术测定水中细菌总数外，现在已有许多种快速、简便的微生物检测仪或试剂纸等也用来测定水中细菌总数。 1 材料与方法 1.1 时间地点 (1) 实验时间 2010年10月26日～27日 (2) 实验地点 太原师范学院南区实验教学楼微生物实验室 1.2 材料、试剂与仪器 (1) 实验材料 自来水 (2) 实验试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 1mol/LNaOH 1mol/LHCl灭菌水 (3) 实验仪器 高压蒸气灭菌锅 培养皿 天平 pH试纸（pH5.5-9.0） 量筒 玻璃棒 电热炉 牛角匙 移液管 1.3 实验方法 1.3.1 灭菌 （1）首先将内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。 （2）放回内锅层,并把实验所用的培养皿、三角烧杯、移液管放入其中。 （3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。 （4）用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MPa,121℃ （5）灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。 1.3.2 水样的采取 放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。 1.3.3 制备牛肉膏蛋白胨培养基 （1）称量 按培养基配方依次准确的称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 （3）调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节。 1.3.4 细菌总数测定 （