实验一培养基的配制.docVIP

实验一培养基的配制 实验目的 1.明确培养基的配制原理。 2.掌握配制培养基的一般方法和步骤。 实验内容 学习细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物培养基的配制。 实验原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。 各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用高氏I号培养基，培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基。另外还有固体、液体、加富、选择、鉴别等培养基之分。在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。琼脂只是固体培养基的支持物，一般不为微生物所利用。它在96℃以上熔化成液体，而在45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。 培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵母菌的pH偏酸；细菌、放线菌的pH为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的pH值调到一定的范围。 牛肉膏蛋白胨培养基配方 牛肉膏3.0g 蛋白胨10.0g NaCl5.0g 水1000mL pH7.4~7.6 高氏I号培养基配方 可溶性淀粉20g NaCl0.5g KNO31g K2HPO4·3H2O0.5g MgSO4·7H2O0.5g FeSO4·7H2O0.01g 琼脂15—25g 水1000mL pH7.4~7.6 马铃薯培养基配方 马铃薯（去皮）200g 葡萄糖（或蔗糖）20g 琼脂15~25g 水1000ml 自然pH 察氏培养基配方 蔗糖30g NaNO32g K2HPO41g KCl0.5g MgSO4·7H2O0.5g FeSO4·7H2O0.01g 琼脂15~25g 蒸馏水1000ml 自然pH LB培养基：（大肠杆菌用） 胰蛋白胨10g/L 酵母提取物5g/L NaCl10g/L 琼脂粉15g/L 用1moL/LNaOH调节pH 枯草芽孢杆菌常用培养基配方：1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+15g琼脂 实验器材 牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCl，KNO3，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeS04·7H2O，马铃薯，蔗糖等。 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，pH试纸(pH5.5~9.0)，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 实验步骤 1．牛肉膏蛋白胨培养基配制方法 (1)称量：按培养基配方比例依次推确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCL放人烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可按在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。 (2)溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入己溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时．需不断搅拌．以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影晌细菌生长。 (3)调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用mol/LHCL进行调节。 对于有些要求pH较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行。 pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整PH。 (4)过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。一般无特殊要求的情况下可以省去（本实验勿需过滤）。 (5)分装 按实验要求，可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内。 1)液体分装：分装高度以试管高度的l／4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。 2)固体分装：分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭