制备液相色谱技术(LC-MS)精编PPT课件.pptVIP

结束 酶、蛋白和其他生物分子；－－－微克 生物和生化测试以及合成反应副产物、生物药代、天然产物－－－－毫克 对照品（分析标准）、毒理学筛选化合物、高纯物中的主成分、合成副产物－－－－－－克 活性化合物、药物－－－－－－公斤级 有关分析方法选择性的优化： 等温线决定色谱峰的形状（峰宽、峰的对称性等），并且还会影响到色谱峰的分离度。 吸附等温线如果是线性的，那末，容量因子k’应当是一个常数，表现在色谱峰上，色谱峰峰宽为常数，并且色谱峰是对称的。 当样品过载时，吸附等温线偏离线性，容量因子k’就会发生变化，表现在色谱峰上，色谱峰峰宽加大，并且色谱峰不对称。 制备液相许多情况下都是过载使用的，色谱峰不会象分析型色谱峰那样漂亮，在这种情况下，需考虑三个参数：产量、收益、纯度。 三者的关系及对应的色谱图请看： 等温线决定色谱峰的形状（峰宽、峰的对称性等），并且还会影响到色谱峰的分离度。 吸附等温线如果是线性的，那末，容量因子k’应当是一个常数，表现在色谱峰上，色谱峰峰宽为常数，并且色谱峰是对称的。 浓度超载： 由化合物在流动相中的溶解度决定 K’位于吸附等温线的“制备”区域 产量由选择性决定 固定相颗粒尺寸影响较小 体积超载： 决定与进样的体积 K’位于吸附等温线的“分析”区域 产量由柱径决定 需要小的固定相颗粒 通常两种超载结合使用；浓度超载被优先考虑，因为这样会由较大的产量。 先通过扩展计算，根据计算结果，设计制备液相的条件。 计算1： 分析柱：柱内径：3mm 流量：0.6ml/min 制备柱：柱内径：21.2mm 求算流量：? 计算2： 分析柱：最大进样量500微克，流量：0.6ml/min 柱内径：1.5mm 制备柱：柱内径：10.6mm 求算最大进样量？微克，流量：?ml/min 计算1： 分析柱：柱内径：3mm 流量：0.6ml/min 制备柱：柱内径：21.2mm 求算流量：? 计算2： 分析柱：最大进样量500微克，流量：0.6ml/min 柱内径：1.5mm 制备柱：柱内径：10.6mm 求算最大进样量？微克，流量：?ml/min 利用正、负斜率按峰进行馏分收集。 Peak-based 正、负斜率和阈值可预先设置。 当色谱信号都超出预先设置的正斜率和阈值两个参数时，将触发峰的收集信号； 当色谱信号低于阈值或低于预先设置的负斜率时，将触发停止收集信号。 设置阈值的目的是为了消除噪声的影响。 Peak-based实例（只收集后面这一组分） 基于质量（Mass-based） 根据馏分的质量作为指令参数，触发馏分收集器。 特点： 馏分纯度高、且收益高； 馏分保留时间以及色谱峰峰形改变都不会影响到馏分的纯度； 参数设置方便； 需配备MS检测器，设备费用投入较大。 Mass-based 当使用按质量进行馏分收集时，只有当MSD检测到色谱峰含有目标质量数，且该目标质量数的强度超出特定的阈值时，馏分收集才被触发。这就确保了在每次进样中只收集含目标化合物的馏分。大部分情况下只有一个馏分。 不足之处是注入的其他样品组分不能回收。 按质量数进行馏分收集的结果 三种馏分收集方式的比较 X-Based 馏分纯度 馏分收益 Time 不高 高 Peak 高 不高 Mass 高 高 它们与纯度、产量和收益（PTY）的关系怎样？ 结合实际需求合理选择。 三种馏分收集方式如何选择？ 高效制备液相色谱流路示意图 1、延迟体积校正2、扩散影响 两个问题： 什么是延迟体积？ 理想情况下，当检测器检测到组分信号时，同一时刻，组分也被馏分收集器收集到。 实际情况下，这是做不到的，因为存在一个延迟体积。 延迟体积：检测池到馏分收集器之间管路的体积。 高效制备液相色谱流路示意图 延迟体积校正 后运行时间：是指分析物组分从检测池到馏分收集器所用的时间。 为了准确地触发馏分收集器的启动和停止，必须测定后运行时间。后运行时间可以转换成与流速无关的延迟体积。 后运行时间测定方法之一： 通过在流路内注射一种染料，当馏分收集器针尖出现该染料时记录时间。 后运行时间＝t馏分收集器- t检测器 后运行时间测定方法之二： 在馏分收集器内装入一个检测器，该检测器称为延迟传感器。将延迟校正物注入流路，两个检测器都记录信号。两个检测器之间的时间差就是后运行时间。