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1.标记免疫分析的发展过程 1.标记免疫分析的发展过程 2.标记免疫分析的分类1 2.标记免疫分析的分类1 2.标记免疫分析的分类2 免疫细胞化学技术 一.免疫荧光细胞化学技术--常用荧光素 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法1 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法2 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法3 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法4 一.免疫荧光组织化学技术--常用方法4 二.免疫酶组化技术--常用酶 二.免疫酶组化技术--常用酶 二.免疫酶组化技术--常用酶 酶标记抗体免疫组化—常用方法1 酶标记抗体免疫组化—常用方法2 酶标记抗体免疫组化—常用方法3 非标记抗体免疫酶组化—常用方法1 非标记抗体免疫酶组化—常用方法2 非标记抗体免疫酶组化—常用方法3 非标记抗体免疫酶组化—常用方法4 三.亲合免疫组织化学技术—常用方法 三.亲合免疫组织化学技术—常用方法 四.免疫金银及铁标记免疫组化技术 免疫标记测定技术 一、荧光免疫测定技术 一、荧光免疫测定技术 二.放射免疫分析 二.放射免疫分析 三.酶免疫测定(enzyme immunoassay，EIA) 三.酶免疫测定(enzyme immunoassay，EIA) 1.固相酶免疫测定—常用方法1 1.固相酶免疫测定—常用方法2 1.固相酶免疫测定—常用方法3 1.固相酶免疫测定—常用方法4 1.固相酶免疫测定—常用方法5 1.固相酶免疫测定—常用方法7 2.液相酶免疫测定 3.均相酶免疫测定 四.金免疫技术(immunogold labelling technique) 五.发光免疫分析 六.免疫PCR(IM-PCR) 六.免疫PCR(IM-PCR) 免疫学检测技术展望1、客观性2、特异性3、敏感性4、定性5、定量6、定位7、免疫检测技术选择 1.荧光偏振免疫分析(fluorescence polarization immunoassay，FPIA) 2.均相荧光免疫分析(homogeneous fluorescence immunoassay) ★荧光激发传递免疫分析法(fluorescence excitation transfer immunoassay) 已用于吗啡和IgG等的定量测定。 ★荧光猝灭免疫测定法(fluorescence quenching immunoassay) ★粒子浓缩荧光免疫分析 (particle concentration fluorescence immunoassay，PCFIA) ★时间分辨荧光免疫测定(time-resolved fluoro-immunoassay，TrFIA) ★荧光激活细胞分类仪：流式细胞术 荧光偏振免疫分析仪 流式细胞仪 1.放射免疫测定(radioimmunoassay，RIA)原理：标记抗原和未标记待测抗原对有限量抗体的竞争性结合(或竞争性抑制)反应。 有限的Ab Ag 放射 元素 放射 元素 放射 元素 Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag 放射 元素 放射 元素 放射 元素 Ag Ag 2.放射受体分析(radioreceptor assay，RRA)原理：与免疫放射测定相似。用于测定受体的亲和常数、解离常数、受体结合数以及定位分析等。 3.免疫放射测定(immunoradioimetric assay IRMA)原理:待测抗原与过量标记抗体的非竞争结合反应，然后加入固相的抗原免疫吸附剂以结合游离的标记抗体，离心除去沉淀，测定上清液中放射性强度，从而推算出检晶中抗原含量 酶免疫测定分类： ★非均相酶免疫测定(heterogeneous enzyme immunoassay) ★均相酶免疫测定(homogeneous enzyme immunoassay) 常用标记酶：HRP、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。 非均相酶免疫测定(heterogeneous enzyme immunoassay)是目前应用最广泛，又分为： ★固相酶免疫测定： 琼脂糖珠(Sepharose 4B)作为载体的DASS体系 聚苯乙烯及其他固相支持物的酶联免疫吸附试验 ★液相酶免疫测定 (1)间接法：已知抗原吸附固相载体-待检抗体-洗涤-酶标抗抗体-底物显色-目测或酶标仪测光密度值定量测定 Ag Ag Ag Ag 待测Ab 酶 酶 酶 酶 底物 底物 (2)双抗体夹心法：已知抗体吸附固相载体-待检抗原-洗涤-酶标抗体-底物显色 酶 酶 酶 酶 底物 底物 Ag Ag Ag Ag 待测Ag (3)竞争法： ★测定抗原： ★测定抗体： 底物 底物 酶 酶 Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag 待 测 Ag