第十八章 高效液相色谱精编PPT课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二、定量分析方法 1. 外标法 外标校正曲线法 A=a+bC 2. 内标法 内标校正曲线法 Ai/As=a+bCi 内标对比法 3. 内加法 将待测组分i的对照品加入待测样品中，测定峰面积的增量，求算i组分的含量。 例 称取二甲苯试样110.0mg，加入对二甲苯对照品30.0mg，用反相色谱法测定，加入对照品前后的色谱峰面积（mm2） ：对二甲苯为40.0和104.2，间二甲苯为141.8和156.2。计算对二甲苯的百分含量。 解 例 测定生物碱试样中黄连碱和小檗碱，称取内标物，黄连碱和小檗碱的对照品各0.2000g配成溶液后进行色谱分析。测得峰面积分别为3.60，3.43和4.04cm2。称取0.2400g内标物和试样0.8560g，同法测得各峰面积为4.16，3.71和4.54cm2。计算黄连碱和小檗碱的含量。 解 校正因子法 * 内标对比法 * 与气相色谱相比高效液相色谱有哪些优点和不足？ 高效液相色谱以液体为流动相，只要被分析的物质在选用的流动相中有一定的溶解度便可以分析，适用性广，特别适合于沸点高、极性强、热稳定性差的化合物。 气相色谱中流动相是惰性的，仅起运载作用。 高效液相色谱中流动相对组分有一定的亲合力，可以通过改变流动相的种类和组成提高分离的选择性；流动相种类多，选择余地大。 样品的回收较容易，回收是定量的，并可用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。 不足：检测器的灵敏度不及气相色谱 1. 在高效液相色谱中，常用作固定相，又可用作键合相基体的物质是 A. 分子筛 B. 硅胶 C. 氧化铝 D. 活性炭 2. 高效液相色谱中通用型检测器是 A. 紫外吸收检测器 B. 示差折光检测器 C. 热导检测器 D. 荧光检测器 3. 为了测定邻氨基苯酚中微量杂质苯氨，欲让苯氨先于邻氨基苯酚出峰，选用下面的哪种固定相和流动相合适？ 固定相：硅胶、ODS键合相 流动相：水－甲醇、异丙醚－己烷 ? ? ? ? 4. 在ODS键合相为固定相，甲醇－水为流动相时，试判断四种苯并二氮杂苯的出峰顺序。 1. 2. 3. 4. 解：反相键合色谱体系，组分极性越大，k越小，先出峰。 所以出峰顺序为4－2－3－1 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 四、其它固定相 1. 键合型离子交换剂 在硅胶表面键合上各种离子交换剂 阳离子型键合相：强酸性磺酸型 -SO3H 阴离子型键合相：季铵盐型-NR3Cl 2. 手性固定相 蛋白类、多糖、环糊精、?-氢键型、配体交换等 3. 亲和色谱固定相 载体＋配基 * 分离方式的选择 在选择色谱分离方式 前要了解样品性质： （1）样品是大分子还是小分子？分子量在什么范围？ （2）样品是水溶性的还是有机溶剂可溶的？ （3）样品是离子状态还是非离子状态？ 样品 相对分子量 2000 相对分子量 2000 水溶 非水溶 水溶 非水溶 离子型 非离子型或可形成离子对 离子交换色谱或离子色谱 正相键合相色谱 溶于非极性或弱极性溶剂 （极性在CHCl3之下） 溶于中极性或极性溶剂 （极性在CHCl3之上） 反相键合相色谱 溶于CHCl3 硅胶吸附色谱 正相键合相色谱 溶于醇、或乙酸乙酯 离子型 非离子型或可形成离子对 离子交换色谱 分子尺寸30nm 分子尺寸30nm~400nm 反相键合相色谱 尺寸排阻色谱 分子尺寸30nm 分子尺寸30nm~400nm 尺寸排阻色谱 反相键合相色谱 洗脱方式 特殊考虑 温度 色谱方式选择中建议的方式 选择色谱方式 最普遍的情况用反相色谱 在排阻色谱中控制k值 选择色谱柱 选填料类型 控制k值 改变溶剂强度、流速 选择条件 调节分离因子 样品 * 高效液相色谱仪器 * 高效液相色谱仪器 * * 高效液相色谱仪器 * 第三节 高效液相色谱仪 输液系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统、数据记录处理 贮液器 高压泵 梯度洗 脱装置 馏分收集器 检测器 记录仪 试样 进样器 * 一、输液系统 作用：输送流动相通过整个色谱系统 压力：150～350×105 Pa。 由于色谱柱很细，填充剂粒度小，柱阻大，必须有很高的柱前压力，才能获得高速的液流 要求：具备较高的输出压力，流量精度高、稳定、范围宽 种类：恒压泵 恒流泵——柱塞往复泵 （一）高压泵 * * （二）梯度洗脱装置 等强度洗脱：在一个分析周期中，流动相组成保持恒定 梯度洗脱在液相色谱中的作用相当于气相色谱中的程序升温