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二氯酚靛酚钠法测定维生素C含量 不平凡的维C 1497年7月9日到1498年5月30日 达伽马,非洲→印度,160多名船员,100多人死于坏血病 1519年麦哲伦太平洋→南美洲,200多人,仅35人存活 1768年到1780 库克船长,无人死于坏血病 一直到1911年,人类才确定它是因为缺乏维生素C而产生的。 维生素C的功能 胶原蛋白的合成 治疗坏血病 预防牙龈萎缩、出血 抗衰老、抗癌 治疗贫血 预防动脉硬化 提高人体的免疫力 一、实验目的 维生素C是生物体内抗氧化体系成员之一。因此,维生素C含量可作为植物抗衰老和抗逆境的重要生理指标,也可作为果品质量、选育良种的鉴别指标。通过本实验掌握用2,6-二氯酚靛酚钠法测定植物组织维生素C含量的方法。 二、实验原理 2,6-二氯酚靛酚钠是氧化性染料,可将还原态的维生素C氧化成脱氢维生素C,而染料本身从深蓝色被还原成无色的衍生物。 2,6-二氯酚靛酚钠在酸性条件下呈红色。在滴定终点之前,滴下的2,6-二氯酚靛酚钠立即被还原成无色。当溶液从无色转变成微红色时,即为滴定终点。 新鲜生菜 三、实验材料 四、设备与试剂 滴定管、三角瓶、研钵、量筒、移液管 1%草酸,0.1%2,6-二氯酚靛酚钠溶液 五、实验步骤 (一)维生素C的提取 称取1.0 g新鲜样品(已称好),置研钵中,分次加20ml 1%草酸,研成匀浆(用1%的草酸定容20ml)。通过纱布过滤后取10ml放于离心机中3000r/min离心10min,吸取上清使用。 (二)维生素C的测定 吸取滤液10 ml,放入50 ml三角瓶中,立即用0.1% 2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的粉红色在15 s内不消失为止。记录所用滴定液体积(另取10ml 1%草酸作空白对照 )。 (三)标准液的标定 取1mg/ml抗坏血酸溶液1ml置于锥形瓶中,加9ml 1%草酸,用0.1%2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色15s不消失。计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸(取10ml 1%草酸作空白对照)。 1ml 染料相当于0.7mg抗坏血酸 (四)含量计算 维生素C(mg/g样品)=(样品消耗染料体积-空白消耗染料体积)╳提取定容后的体积╳1ml染料能氧化抗坏血酸的毫克数/滴定用的样品体积╳水果质量 六、注意事项 1. 操作要尽可能快,并防止与铁、铜器具接触,以减少维生素C的氧化。 2. 草酸及样品的提取液避免日光直射。
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