发酵动力学讲义.ppt

二、生产阶段 当X=Xmax时，开始以恒定的速度补加培养基(因为此时营养物基本耗完)。 这时，稀释率Dμ max，事实上随着流加的进行，所有限制性营养物都很快被消耗（即流入的营养物与细胞消耗掉的营养物相等）。因此dS/dt＝0。 尽管随时间的延长，培养液中总菌体量增加，但实际上细胞浓度X保持不变，即dX/dt=0，因而μ ≈ D 。 这种dS/dt=0, dX/dt=0, μ ≈ D的状态，就称为“准恒定状态”。 补料分批发酵的重要特征：在准恒定状态下比生长速率与稀释率相等。 分析：虽然存在μ＝D，但与连续培养中恒定状态下的μ＝D不同，在连续培养中D是常数，而在补料分批培养中，随着时间的延长，由于体积增加，即使补料速度不变，稀释率D和比生长速率μ都在变化，并以相同速度降低，因此两种状态实际不同。 在补料分批培养过程中，∵ ∴ * * * * * * 在液体振荡培养(或深层通气培养)中，以菌丝干重作为衡量生长的指标，可获得如图所示的生长曲线。在静止培养中也可获得类似的生长曲线。 丝状真菌的生长过程大致可分为；（1）生长延滞期；（2）迅速生长期；（3）衰退期。 （1）生长延滞期 造成生长延滞的原因有两种：一是孢子萌发前的真正的延滞期，另一种是生长已开始但却无法测量。对真菌的生长延滞期尚未作过仔细研究。 （2）迅速生长期 此时菌丝体干重迅速增加，其立方根与时间成直线关系。因为真菌不是单细胞，其繁殖不以几何倍数增加，故而没有对数生长期。真菌的生长常表现为菌丝尖端的生长和菌丝的分枝，因此受到邻近细胞竞争营养物质的影响。尤其在静止培养时，许多菌丝在空气中生长，必须从邻近的细胞吸收营养物质供生长需要，在迅速生长期中，碳、氮、磷被迅速利用，呼吸强度达到顶峰，代谢产物如酸类可出现或不出现。静止培养时，在迅速生长期的后期的菌膜上格出现孢子。 （3）衰退期 真菌生长进入衰退期的标志，是菌丝干重下降。一般是在一短期内失重很快，以后不再变化。但有些真菌则发生菌丝体自溶，由于其自身所产生的酶类催化几丁质、蛋白质、核酸等分解而释放出氨、游离氨基酸、有机磷化物和有机硫化合物等。处于衰退期的菌丝体的细胞，除顶端较幼细胞的原生质比较稠密均匀外，大多数细胞都出现大的空泡。 生长的停止由以下两种因素之一所决定。在高浓度培养基中，可能是因为有毒代谢产物的积累而阻碍生长，如在高浓度碳水化合物的培养基中可积累有机酸；在含有机氮高的培养基中可积累氨。多数次生物质，如抗生素等，也是在此时合成的。在较稀释的、营养物质平衡良好的培养基中，生长停止的主要因素是碳水化合物的耗尽。当生长停止后，菌丝体的自溶裂解的程度，因菌种的本性和培养条件而导。 * * * * * * 杀念珠菌素发酵中葡萄糖、DNA、抗生素产量的代谢变化 A：DNA；B：葡萄糖；C：杀念珠菌素产量 * * * * ■分批发酵的分类对实践的指导意义 * 从上述分批发酵类型可以分析： 如果生产的产品是生长关联型（如菌体与初级代谢产物），则宜采用有利于细胞生长的培养条件，延长与产物合成有关的对数生长期； 如果产品是非生长关联型（如次级代谢产物），则宜缩短对数生长期，并迅速获得足够量的菌体细胞后延长平衡期，以提高产量。 （2）连续培养（continuous culture） 指在一开放系统中，以一定的速度向发酵罐内连续供给新鲜培养基，同时以相同速度将含有微生物和产物的培养液从发酵罐内放出，从而使发酵罐内液体量维持恒定，使培养物在近似恒定状态下生长和进行代谢活动的方法。 Fin=Fout＞0 连续培养 优点： 恒定状态可有效地延长分批培养中的对数期，达到稳定高速培养微生物或产生大量代谢产物的目的。 避免分批培养所需的清洗、投料、灭菌、接种、放罐等各种操作，有利于提高生产率。 发酵产品质量稳定。 便于自动控制。 缺点： 菌种在长时间培养中易变异，且容易染菌。 若操作不当，新加入的培养基与原有的培养基不易完全混合。 （３）补料分批培养（fed-batch culture） 指在分批发酵中间歇地或连续地补加（流加）新鲜培养基的方法。Fin ≠0（ Fout＝ 0 ，Fout ≠ 0 ） 优点： a.可避免一次投料过多，造成细胞大量生长，溶解氧不足，通气搅拌设备无法适应的弊病; b. 能控制营养缺陷型菌所需营养物量，使之高效率积累产物； c. 有利于前体的补充; d.可实现细胞的高密度培养 e. 便于优化培养。 基质的消耗速度： 发酵过程反应速度的描述 基质的消耗比速： (g.