RNA提取详细步骤及注意事项.ppt

RNA提取;目 录;1、试剂介绍;2、主要提取流程;1、剪取新鲜幼嫩叶片，置于液氮中慢慢反复研磨，直至其成为合格粉末为止。 2、加入1ml Trizol，晃动3-5下，再用枪吹打2-3下，确保全部裂解。 3、室温放置5分钟，使样品充分裂解。 12,000g、 4℃离心10分钟。 4、每毫升 Trizol加入0.2ml氯仿，猛烈晃动15秒，室温放置2-3分钟。 5、12,000g 4℃离心15分钟，然后吸取上层无色水相至一新的离心管中。;6、按1ml最初的Trizol加入0.5ml异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。 7、12,000g、 4℃离心10分钟，弃上清，在管底可见RNA沉淀（透明胶状）。 8、每毫升最初的Trizol加入1ml 75%乙醇（DEPC水配制），剧烈震荡。 9、 7,500g 、4℃离心5分钟，弃上清。再用离心机甩一下（5,000rpm, 离心1分钟），小心吸尽液体。 10、待RNA略干后，加入20μl DEPC水溶解，-80℃冻存。;4、注意事项;4、在操作中当加入变性剂氯仿后，须剧烈震荡，这样才能彻底使两相混匀。 5、在提取核酸时，如样品浓度低，则应增加有机溶剂沉淀时间，－80℃下30min或－20℃过夜将有助于增加核酸的沉淀量。 6、切勿让RNA过分干燥，否则将难溶解。;