生物医学基础以及临床--北京大学临床肿瘤学院.pptVIP

p53基因治疗的基础与临床研究 北京大学临床肿瘤学院 张珊文 2007年11月 P53基因治疗的临床机理 瘤内注射今又生p53基因及其靶基因的表达 治疗P53基因 上调P21基因及Bax基因 下调VEGF基因 方法：IHC和RT－PCR及测序 瘤内注射的意义 分组方案 多中心随机对照II/III期临床试验 基因－放疗组（GTRT） 单纯放疗组（RT） 方案 基因－放疗组（GTRT）每周5瘤内注射今又生1012VP/次，第三天放疗，病灶区采用与RT组相同照射,予70Gy/35f/7～8w, 第五周(40Gy) ，第八周(70Gy) ，疗后2个月为疗效确认，以CT测量肿瘤体积，计算40Gy、70Gy、和确认时肿瘤缩小率（％）. 按WHO实体肿瘤客观疗效评定标准，疗效评定为CR、PR、SD、PD。 实验室特殊检查 肿瘤组织p53蛋白检测（IHC法和测序法） 病毒抗体检测（ELASA法） 临床常规检验 每周血、尿、便 每月血生化（BUN,Cr,AST,ALT) 每月心电图、胸片 毒性反应 按WHO常见毒性分级标准评价毒付反应，按轻⑴、中⑵、重⑶、威胁生命⑷评价和记录。重点观察体温变化。一般在注射今又生后几小时内出现短暂的自限性发热（self-limited fever），38?C以上发烧者可酌情给予退烧药（消炎痛栓或柴胡注射液）。 统计学分析 全部数据的统计分析，采用SPSS11.0 统计软件，瘤灶缩小率比较采用t检验（两组方差不齐时，用t’检验），疗效比较采用Pearson卡方检验，不良反应测定值与基线比较采用Dunnett-t检验。 今又生的坏死效应 注射Adp53部位肿瘤B超显示肿瘤血供迅速减少甚至消失，CT显示肿瘤内CT值明显下降，坏死明显。有3例在40Gy时穿刺病理证实未见癌细胞（1-10侯凤才、1－14李文花、1－16邱礼斌） 刘凯恶性神经鞘瘤例 注药前P53+25%,PCR+ 何华树 注药后P53＋25％ 何华树骨肉瘤例， 注药前P53－,PCR± 刘凯 注药后P53+75%,PCR++ P53基因表达 张沂择舌癌例，注药前P21－ 张沂择注药后P21＋50％ 丁先进NPC例，注药前P21— 丁先进注药后P21 ＋25％ P21基因表达 丁先进NPC，注药前Bax－ 丁先进注药后Bax＋25～50％ 郑昌华NPC例，注药前Bax— 郑昌华例注药后Bax＋50% 张沂择例注药后Bax＋25-50％ 张沂择舌癌例注药前Bax－ 丁先进NPC例注药前VEGF＋75％ 丁先进例注药后VEGF－ 马冰清平滑肌肉瘤例注药前VEGF＋75% 马冰清例注药后VEGF－ 张子苑例注药后VEGF＋25-50% 张子苑NPC例注药前VEGF＋75% 胃体癌，低分化腺癌（上图，疗前） VEGF－ P53灌注热化疗后手术，胃角残存肿瘤，镜下仅见间质内散在稀少变性癌细胞 VEGF＋ 今又生特有p53序列 331bp 马冰清，平滑肌肉瘤，IHC法示：用药前+75%,用药后+75% PCR法示：用药前＋，用药后＋＋ 注药前仅38％吻合（如上图），注药后与p53专有序列比较100％吻合（如下图） 马冰清注药前 与p53专有序列图比较仅38％吻合 马冰清注药后与p53专有序列图比较达100％吻合 例2： (龚兆洪NPC, IHC示－)注今又生前样品p53与今又生专有p53序列仅有38％吻合 0720290_G1_P53F_B06_0721708:DNAMAN2 identity= 38% 5 GTGGTGGTGCCCTATGAGCCGCCTGAGGTTGGCTCTGACTGTACCACCATCCA CT ACAAC 41 GTGGTGAGGCTCCCCTTTCTT GCGGAGATTCTCTTCC TCTGTGCGCCGGTCTCTC CCAGG 65 TACATGTGTAACAGTTCCTGCATGGGCGGCATGAACCGGAGGCCCATCCTCACCATCATC 101 ACAGGCACAAACACGCACCTCAAAGCTGTTCCGTCCCAGTAGATTACCACTGGAGTCTTC 125 ACACTGGAAGACTCCAGTGGTAATCTACTGGGACGGAACAGCTTTGAGGTGCGTGTTTGT 161 CAGTGTGATGATGGTGAGGATGGGCCTCCGGTTCATGCCGCCCATGCAGGAACTGTTACA 185 GCCTGTCCTGGGAGAGACCGGCGCACAGAGGAAGAGAATCTCCGCAAGAAAGGGGAGCCT