课件：微生物检验常规培养基的制作.pptVIP

1.1.5过滤 用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。 1.2固体培养基的配制 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去的水分。 2.培养基的分装 根据不同需要，可将已配好的培养基分装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。 2.1试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹住玻璃嘴，使培养基直接流入试管内。 注：分装在不同规格三角烧瓶、试管等容器中，分装量不宜超过容器的2/3，否则会溢出。 装入试管培养基的量，视试管大小及需要而定。若所用试管大小为15*150mm时，液体培养基可分装至试管高度1/4左右为宜；如分装固体或半固体培养基时，琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1/5，半固体培养基分装量为管高的1/3为宜。 2.2锥形瓶的分装 用于振荡培养微生物时，可在250ml锥形瓶中加入50ml的液体培养基；若用于制作平板培养基时，可在250ml锥形瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉（按2%计算）。灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。 3.棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎 为了培养好氧性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或锥形瓶内空气先进行过滤，除菌。通常方法是在试管及锥形瓶口加上棉花塞等。 3.1试管棉塞的制作 制棉塞时，应选取用大小，厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔中，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠法制作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2/3在试管内，1/3在试管外。 将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用铅笔注明培养基名称及配制日期。灭菌待用。 3.2锥形瓶棉塞制作 通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上。在装好培养基并塞好棉塞或包上8层纱布或盖好培养容器封口膜的锥形瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线捆好，灭菌待用。 4.培养基的灭菌 下一章节详述。 5.斜面和平板的制作 5.1斜面的制作 将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热倾斜固定，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管长度1/2为宜。如制作半固体或固体深层培养基时，灭菌后则应垂直放置至冷凝。 葡萄糖：乳糖＝1：9 下黄上不黄 为分解葡萄糖，不分解乳糖 上下均黄 为分解葡萄糖、乳糖 上下均不黄 为非发酵菌 中间变为黑色为产H2S 5.2平板的制作 将装在锥形瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，冷却至50摄氏度左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上冷凝水太多，温度低于50摄氏度，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在酒精灯旁进行，左手拿培养皿，右手拿锥形瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼瓶口。用左手大拇指将培养皿盖打开一缝。置于桌上，轻轻旋转平皿。使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。 三、实验材料 3.1药品 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、酵母膏、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4、MgSO4?7H2O和FeSO4?7H2O、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。 3.2溶液 1mol/LNaOH、1mol/LHCl。 3.3仪器 天平、高压蒸汽灭菌器。 3.4玻璃器皿 移液管、试管、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.5其他常用器皿 药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。 四、实验内容 4.1肉膏蛋白胨培养基的配制 4.1.1培养基成分 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml Ph 7.2 4.1.2配制方法 （1）称量及融化 分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2/3左右的蒸馏水，用玻璃棒挑取牛肉膏