免疫检测技术.PPTVIP

免疫电泳原理图解 火箭免疫电泳 火箭免疫电泳技术又称作单向电泳扩散 免疫沉淀试验，它是由单向扩散发展起 来的一项定量技术，实质上是加速度的 单向扩散。 沉淀线的高度与抗原量成正比 火箭电泳图 二、凝集反应（Agglutination） 颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体，在适当电解 质存在的条件下，经过一定时间后出现肉眼可见凝集块 称为凝集反应。 1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。 2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。 妊娠免疫诊断试验 孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。（HCG是可溶性抗原 ） 反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗HCG抗体。 三、补体结合实验 （2个系统，5种成分） 已知抗原加入血清（检测抗体） 加入标准量补体 加入包被抗体的红细胞 检测红细胞溶解情况 Ag Patient’s serum Ab No Ab Ag 三、补体结合实验 （2个系统，5种成分） 免疫标记技术是采用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反应。 免疫标记技术既可对样品作定性、定量检测，也可进行定位分析，且大大提高了方法的灵敏度，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。 四、免疫标记技术 常见标记免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 荧光免疫技术 四、免疫标记技术 该法是用放射性核素作为标记物标记抗原或抗体 所进行的抗原抗体反应，尽管放射免疫技术需特殊 仪器设备且有一定的放射性危害，但由于其具有高 度的灵敏度（pg）和自动化检测等特点，因此在实 验研究和临床检测中仍被广泛应用。 主要用于激素、小分子药物、肿瘤标志物等 小分子化合物的定量分析。 1. 放射免疫技术（125I） 放射免疫分析－基本原理 竞争性结合反应的经 典标记抗原（Ag*）和 非标记抗原（Ag）与限 量抗体(Ab)竞争性结合 Ag*和Ag具有等同的 与Ab结合能力 Ag* Ab Ag 标记抗原 特异性抗体 待测抗原 ( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物 分离Ag*-Ab 和游离Ag* 从标准曲线上读知含量 测定Ag*-Ab和游离Ag*放射性 放射免疫测定法(RIA)示意图 RIA法原理及标准曲线 75 50 30 10 0 1 10 100 1000 未标记抗原浓度（ng/mL) 结合/未结合的放射活性（%） Ag*-Ab Ag* 将荧光素（异硫氰酸荧光素或罗丹明等）标记抗体， 制成荧光抗体诊断试剂。 用荧光显微镜观察荧光的产生或荧光强度，以此判断 抗原的存在、定位和分布情况。 免疫荧光技术有直接法和间接法等。 2. 免疫荧光技术 免疫荧光技术——直接法 Ag 荧光素标记的 特异性抗体 组织切片 免疫荧光技术——间接法 Ag 荧光素标记 的抗抗体 组织切片 待测抗体 免 疫 荧 光 染 色 显 示 细 胞 骨 架 免疫荧光染色是利用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体对细胞或组织内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。该技术与荧光显微镜观察相结合，可对特定的蛋白质进行细胞或组织内的精确定位。 常用于抗原、抗体标记的荧光染料有以下几种 显示绿色荧光：Fluorescein isothocyancie(FITC),Alexa-488 显示红色荧光：Rhodamine B, Texas Red, Alexa-546,568,594 显示蓝色荧光：Alexa－350 用Alexa488标记的抗人α-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色 人皮肤角化细胞免疫荧光染色 用抗α-tubulin抗体染色显示微管(绿色); 细胞核: 红色, DAPI染色(激光共聚焦显微镜照片) PtK1细胞免疫荧光染色 * * * * * * * 第九章 免疫检测技术 免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法。 具有高度精确、灵敏、特异的特点。 可用于免疫学的基础理论和应用研究，也可应用于生物学研究的各个领域。 1 、免疫疾病诊断 2 、动物植物生理活动研究（激素、维生素） 3 、物种及微生物鉴定 4 、动物、植物性状的免疫标记 5 、免疫增强药物和疫苗的研究 6 、发病机理研究 7 、分子生物学研究 免疫检测技术在生物科学领域中的应用：