第十一章荧光分析法课件.ppt

* 第二节 荧光定量分析方法 溶液的荧光（或磷光）强度 1. 荧光强度与溶液浓度的关系 荧光强度If正比于吸收的光量Ia与荧光量子产率? 。 If = ? Ia 式中?为荧光量子效率，又根据Beer定律 Ia = I0 - It = I0(1- e -? l C) I0和It分别是入射光强度和透射光强度。代入上式得 If = ? I0(1- 10 -? l c) = ? I0(1- e -2.3? l c) * 整理得： If =2.3 ? I0 ?lc 当入射光强度I0 和l一定时，上式为： If = K C 即荧光强度与荧光物质的浓度成之正比，但这种线性关系只有在极稀的溶液中，当?lc?0.05时才成立。对于较浓溶液，由于猝灭现象和自吸收等原因，使荧光强度和浓度不呈线性关系。 * 定量分析方法 定量分析依据 If = KC Ip = KC 1. 标准曲线法——最常用的定量分析方法 将已知量的标准物质与试样在相同条件下处理，配制一系列标准液，测定它们的相对发光强度。 以相对荧光强度为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标 浓度 C1 C2 C3 C4 C5 Cx 荧光强度 If1 If2 If3 If4 If5 Ifx If Ifx Cx C * 2. 荧光猝灭法 把荧光猝灭用在定量分析上，具有较高的灵敏度和选择性 若荧光物质 M 与猝灭剂 Q 生成不发荧光的基态配合物MQ M + Q = MQ（非荧光物质） 经推导得出： 猝灭剂加入前 的荧光强度 猝灭剂加入后试 液的荧光强度 常数 猝灭剂浓度 I前/I后与C（Q）有线性关系，可求猝灭剂含量 与标准曲线法相似，对一定浓度的荧光体系，分别加入一系列不同量的猝灭剂 Q ，配成一个荧光物质—猝灭剂体系，然后在相同条件下测定它们的荧光强度，得一曲线 取相同荧光物质 CM CM CM CM … CM 加不同量Q CQ0 CQ1 CQ2 CQ3 … CQx (CQ0 =0) 测 If I前 I后1 I后2 I后3 … I后 x 计算 I前/I后 I前/I后1 I前/I后2 I前/I后3 … I前/I后x I前/I后x CQx CQ I前/I后 * 3. 比较法——比较简单 如果试样数量不多，可用比较法进行测量 配一标准溶液浓度为Cs， Cs与未知液浓度Cx相近，并在相同条件下测定它们的荧光强度 未知液 If x = KCx 标准液 If s = KCs 比较 * 一、荧光分光光度计 用于测量荧光的仪器由激发光源、样品池、用于选择激发光波长和荧光波长的单色器以及检测器四部分组成。 由光源发射的光经第一单色器得到所需的激发光波长，通过样品池后，一部分光能被荧光物质所吸收，荧光物质被激发后，发射荧光。为了消除入射光和散射光的影响， 第三节 荧光分光光度计和 荧光分析新技术 * 荧光分析仪器——主要由光源、单色器、液槽、检测器和显示器组成 光源 第一单色器 液池 检测器 第二单色器 检测器 放大器及记录器 ex ? em 与分光光度计有两点不同 ①两个单色器 ②检测器与激发光互成直角 I0 I 荧 光 计 示 意 图 光源 第一单色片 样品池 第二单色片 光电管 显示器 ******** * 四 荧光分析新技术简介 激光荧光分析 时间分辨荧光分析 同步荧光分析 胶束增敏荧光分析 Company Logo LOGO 第十一章 荧光分析法 * * 概述 一、分子发光分析法及其分类 　　某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发